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您看滬鼎培養(yǎng)大鼠胰島細(xì)胞,，八步即能完成實(shí)驗(yàn)
閱讀：1118 發(fā)布時間：2014-2-20 這是一項(xiàng)比較熱門的實(shí)驗(yàn),，如果您需要用到,、了解的話可以拿出空余的兩分鐘時間來閱讀下面的文章。我們把本實(shí)驗(yàn)的步驟分為了八個部分,，下面就來分條說明,。
試劑都是有它的配制方法的，這里的實(shí)驗(yàn)是培養(yǎng)大鼠胰島細(xì)胞,，在我公司中所能看見的大鼠二字也就是試劑盒方面了,，其中的種屬大鼠是非常熱銷的。我們在做這個實(shí)驗(yàn)的*步就是要將一周齡Wistar大鼠斷頸處死,，熱愛動漫的朋友有沒有莫名的想到了兵長呢,？然后就要把它放于75%乙醇浸泡15 分鐘，無菌取出胰腺，于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗,，用眼科剪仔細(xì)清除脂肪,、包膜、血管等胰外組織,，轉(zhuǎn)入青霉素小瓶中。
第二個步驟就是要加入少量無菌D-Hanks’液,，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片,，用滴管輕輕吸出上層細(xì)小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復(fù)清洗 8~10 次,，加入10 倍體積無菌消化酶液[胰蛋白酶-膠原酶消化液：0.05 g 胰蛋白酶,，0.025 g Ⅴ型膠原酶(663 U/mg)，0.05 g 葡萄糖,，溶于100mL 無Ca2+,、Mg2+的0.01 mol/L PBS(pH 值為 7.4)溶液，用0.22 µm 微孔濾膜濾菌],，38℃±1℃消化,，消化過程中不斷震蕩，10 分鐘后棄去上清液,。
那么多的數(shù)字文字看上去有些眼花繚亂啊,，其實(shí)操作時會發(fā)現(xiàn)沒有那么麻煩的。
我們第三步要用無菌D-Hanks’液將組織塊清洗 2~3 次,，加入新鮮酶液繼續(xù)消化,，重復(fù)上述步驟，此時組織塊邊緣模糊,。
第四個步驟的時候要將組織塊浸入消化酶液中,，38℃±1℃消化10 分鐘，將消化酶液與組織塊分開,，組織塊重新加入新鮮消化酶液進(jìn)行消化,；而原消化酶液1500 rpm離心 10 分鐘，取沉淀即為消化下的細(xì)胞,，重新用無菌D-Hanks’懸浮,，離心，重復(fù) 1~2 次,，再用培養(yǎng)基洗 2~3 次,，用培養(yǎng)基懸浮即得細(xì)胞懸液。
實(shí)驗(yàn)過程到這里已經(jīng)說了一半了,，為了完成漂亮的實(shí)驗(yàn),，您在操作的時候也要注意一些小細(xì)節(jié)部分
我們第五步的時候，要將消化過的組織塊重復(fù)消化5~6 次至組織塊消化*，重復(fù)以上操作,。
第六步,，合并幾次所得細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞濃度為 2×105個細(xì)胞/mL,，將細(xì)胞懸液接種于24 孔塑料培養(yǎng)板中，每孔1 mL,，置于37℃,，5%CO2，飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
文章看起來前面文字密密麻麻,，中間有些松散。這里也能夠看出,，前面的步驟流程是比較多的,，到了中間就會稍微的簡單一些，因?yàn)椴襟E上有重復(fù)上面的,，做過了的再次重復(fù)就會簡單一點(diǎn),。
到了第七步的時候，由于成纖維細(xì)胞貼壁要比胰島細(xì)胞迅速,，接種15 h 后,，輕輕振蕩培養(yǎng)板，將上面未貼壁的細(xì)胞接入新的培養(yǎng)板中,，可除去部分成纖維細(xì)胞,。
第八步，將新培養(yǎng)板中細(xì)胞培養(yǎng) 48 小時后,，換新鮮配置的含有2.5 ng/mL 的碘乙酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)5 h,，可除去絕大部分成纖維細(xì)胞，而胰島細(xì)胞不受傷害,，換不含碘乙酸的培養(yǎng)基洗2 次,，并換不含碘乙酸的培養(yǎng)基在 37℃、5% CO2,，飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
我們要每隔3天換培養(yǎng)液，獲得單層胰島細(xì)胞,。
您看滬鼎培養(yǎng)大鼠胰島細(xì)胞,，八步即能完成實(shí)驗(yàn)。開學(xué)迎來,，您需要大鼠elisa試劑盒的話現(xiàn)在個訂購七折優(yōu)惠,！本實(shí)驗(yàn)中我們需要用到的試劑有：
1,、D-Hanks’液
2、蛋白酶
3,、Ⅴ型膠原酶
4,、葡萄糖
5、碘乙酸
歡迎您購買我公司產(chǎn)品,，在您實(shí)驗(yàn)的過程中,，如果遇到了產(chǎn)品以及技術(shù)的問題來電即可，我們將為您安排技術(shù)人員給您做全程的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),。