化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
操作過程中的問題造成假陽性
閱讀：1503 發(fā)布時間：2013-9-24操作過程中的問題造成假陽性
在常見的elisa檢測實驗中，有很多的過程都會導(dǎo)致實驗失敗,，一點小小的誤差也不能盡人意，所有操作過程中一定要注意這些方面，保證實驗成功,。
3、1加樣
對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進行稀釋,，如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差,，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時，很小的誤差，會導(dǎo)致較大的相對誤差,，使陰性（或弱陽性）標(biāo)本呈陽性（或陰性）,。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。目前,，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,，可較好地避免以上誤差。
3,、2洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,，應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),，ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),，以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。
3、3 溫育
每種試劑都有其*反應(yīng)模式,，其中溫度和溫育時間控制是重要因素,。因孵育溫度高，反應(yīng)時間長,，會造成整板本底高,，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,，反應(yīng)板不宜疊放,，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋,。
3、4酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器,，酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,，決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進行保養(yǎng),，對濾光片要定期校正,；其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確，使用雙波長,，一個檢測波長,，一個參比波長,，以消除微孔板底部劃痕、不平,、指印或液面高度差異造成的光干擾,。此外，在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條,。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,。
以上四種方法都有可能在elisa試劑盒檢測上令結(jié)果不一樣，從而導(dǎo)致實驗失敗,，我司技術(shù)在經(jīng)過多次實驗中得出以上結(jié)論,，所以elisa試劑盒實驗?zāi)芊癯晒θQ于多方面的因素，我司所售elisa試劑盒均可保證質(zhì)量,，提供免費技術(shù)指導(dǎo)及實驗代測服務(wù),，為您節(jié)省時間，提高實驗成功度,，咨詢關(guān)于elisa試劑盒的任何問題,。我們恭候您的光臨。