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實驗蛋白質(zhì)分離純化透析終點的抉擇
閱讀：3070 發(fā)布時間：2013-7-15實驗蛋白質(zhì)分離純化透析終點的抉擇
在蛋白質(zhì)分離純化過程中,，用到透析方法，但如何判斷透析過程結(jié)束了呢？針對具體蛋白質(zhì)怎么知道要透析多久,？ 在蛋白質(zhì)分離純化實驗中，客戶經(jīng)常會提及蛋白質(zhì)透析終點該如何判斷,，以下是我司技術(shù)根據(jù)各種實驗總結(jié)的經(jīng)驗之談,，方便大家學(xué)習(xí)交流。
一：
市場上有種筆式電導(dǎo)儀,，測量范圍在1－2000us/cm,，價格才一兩百元，使用也非常方便,。要是透析后上柱的話,，電導(dǎo)在1500以下就可以了。
二：
我做過蛋白的純化,，透析也是常做的,。
我覺得上面的一些朋友說得太理論了,。樓主剛接觸蛋白純化，用的是透析袋吧,。
根據(jù)我的經(jīng)驗,，想*把蛋白里的鹽分透掉不可能，而且蛋白在透析的過程中多少會損失一部分,，所以我覺得如果你的蛋白很珍貴,，就不用非透得很干凈，否則適得其反,，經(jīng)常換超純水倒是很重要的,，一般透個24小時-48小時足夠了。要加滿水,，充分浸泡,。
蛋白如果含鹽量高，凍干后往往含有結(jié)晶樣的物質(zhì)比較多,，
而蛋白如果含鹽量低,，則凍干后往往成棉絮狀
這從表觀上有助于你判斷透析效果，或者你可以取一些蛋白,，溶解后測蛋白質(zhì)質(zhì)量百分?jǐn)?shù),，剩下的基本就是鹽含量了。
提醒你一下：
透析袋不能太小,，否則透析后可能會脹破袋子,，那就慘了。
太大也不好,，容易讓蛋白殘留在袋內(nèi),，記得用移液器加蛋白，取蛋白,，這樣能zui大限度節(jié)約蛋白,。
三：
如果是NAcl,可用硝酸銀溶液滴到透析液中無沉淀渾濁就可以,同樣道理如果是硫酸根離子可用氯化鋇溶液去滴,別的就不知道了.當(dāng)然也可用電導(dǎo)儀測定電導(dǎo),這樣.時間長短和你樣品鹽濃度,透析攪拌速度,用的透析液體積等都有關(guān)系,沒確切時間.
四：
測電導(dǎo)是非常可行的,。
現(xiàn)測你所用透析緩沖液的電導(dǎo),，再測一下你樣品的電導(dǎo)，透析到你的樣品中的電導(dǎo)率與透析緩沖液的電導(dǎo)率接近為止,。
看你更換緩沖液的速度,，如果你不斷攪拌并1h左右更換一次緩沖液的話4-6次就可以透析的差不多了，如果你不想多次從透析袋中取出樣品可以在第六次的時候測一下電導(dǎo),；如果你在4度透析的話建議4h更換一次,，加上過一夜一共換3-4次就差不多了。關(guān)鍵看不在什么環(huán)境下透析,，你的樣品在什么樣的環(huán)境下比較穩(wěn)定,。
蛋白質(zhì)的定義：
1：生物體中廣泛存在的一類生物大分子,，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子,。泛指某一類蛋白質(zhì)，與前面的限定詞組成復(fù)合詞時,，一律用“蛋白質(zhì)”,，如血漿蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì),、酶蛋白質(zhì)等,，此時“質(zhì)”字不得省略（習(xí)慣詞除外，新命名者從此）,。凡指具體蛋白質(zhì)時,，“質(zhì)”字可省略，如血紅蛋白,、肌球蛋白等,。
2：不同氨基酸以肽鍵相連所組成的具有一定空間結(jié)構(gòu)的生物大分子物質(zhì)。
蛋白質(zhì)（protein）是生命的物質(zhì)基礎(chǔ),，沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。因此,，它是與生命及與各種形式的生命活動緊密在一起的物質(zhì),。機體中的每一個細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)占人體重量的16.3%,，即一個60kg重的成年人其體內(nèi)約有蛋白質(zhì)9.8kg,。人體內(nèi)蛋白質(zhì)的種類很多，性質(zhì),、功能各異,，但都是由20多種氨基酸按不同比例組合而成的，并在體內(nèi)不斷進行代謝與更新,。
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