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技術(shù)文章

鄰苯二醛顯示組胺熒光法操作方法

閱讀:2994          發(fā)布時(shí)間:2013-7-9

鄰苯二醛顯示組胺熒光法操作方法 
    組胺(HA)是一種血管活性物質(zhì)和致痛物質(zhì),,存在于外周肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞以及  胃黏膜一些內(nèi)分泌細(xì)胞的顆粒中,,也存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一些神經(jīng)元突觸小泡內(nèi),。
 
    1.原理  在一定溫度和濕度下,組織細(xì)胞內(nèi)的組胺與鄰苯二醛(OPT)發(fā)生聚合反應(yīng),。形成的聚合產(chǎn)物發(fā)出兩種熒光,,一是組胺含量高時(shí),呈黃色熒光,,比較穩(wěn)定,,zui大激發(fā)波長為405nm;二是組胺含量低時(shí),。呈藍(lán)色熒光,。不穩(wěn)定,褪色較快,。zui大激發(fā)波長為365nm,。
 
    2.操作程序
    (1)標(biāo)本制備:新鮮組織冰凍切片或鋪片,風(fēng)干后移至含P2O5的干燥器中繼續(xù)于燥4小時(shí),;固定的組織標(biāo)本石蠟切片,脫蠟后風(fēng)干,;
    (2)鄰苯二醛處理:將40mg結(jié)晶鄰苯二醛加入已預(yù)熱至100℃的立式染色缸內(nèi),,蓋好,約15分鐘后,,取出染色缸,,立即將干燥好的組織切片或鋪片移人染色缸內(nèi)2—3分鐘;也可在室溫下將1%鄰苯二醛的乙基苯液直接滴加在切片或鋪片上反應(yīng)4分鐘,;
    (3)濕化:將標(biāo)本移至濕盒內(nèi)(但勿與水直接接觸)2~4分鐘,;
    (4)80℃烘箱中作用5分鐘;
    (5)封片,、熒光顯微鏡觀察分析同前,;
    (6)結(jié)果:含組胺較高的細(xì)胞呈黃色熒光;組胺含量較少的細(xì)胞呈藍(lán)色熒光,。
 
    3.注意事項(xiàng)   
    (1)組胺含量低時(shí),,與鄰苯二醛縮合反應(yīng)的熒光團(tuán)不穩(wěn)定,熒光易淬滅,,需盡快觀察記錄,;
    (2)鄰苯二醛與胰高血糖素等一些多肽的氨基末端組氨酸反應(yīng)亦可形成較強(qiáng)熒光產(chǎn)物;
    (3)濕化處理較為關(guān)鍵,,需嚴(yán)格控制,;
    (4)對(duì)照實(shí)驗(yàn):省略鄰苯二醛液處理步驟,,結(jié)果應(yīng)為陰性。

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