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技術(shù)指導(dǎo)ELISA試劑盒包被方式
閱讀：2195 發(fā)布時(shí)間：2013-4-12
技術(shù)指導(dǎo)ELISA試劑盒包被方式
將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被（coating）,。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程,。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點(diǎn)、濃度等的影響,。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面,。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法,。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,，在這種情況下，直接包被效果不佳,，可以采用間接的捕獲包被法,，即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化,。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面,，其抗原決定簇也得以充分暴露,。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高,，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性,、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳,。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少,，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式,。例如,，在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原,，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合,。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈,，75cm照射12小時(shí)）,，以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),，如聚賴氨酸,、魚精蛋白等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力,。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,，即用親和素先包被載體，然后加入生物素化的DNA,，這種包被方法均勻,、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定,。
脂類物質(zhì)無(wú)法與固相載體結(jié)合,，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后,，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式,。
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