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成人胰腺消化,、胰島分離方法
閱讀：1938 發(fā)布時間：2013-4-1簡述成人胰腺消化、胰島分離方法：
尸體胰腺原位灌洗后置UW液中,，4℃保存運輸,。到實驗室后在4℃ Euro-Collins液中清除非胰組織，從胰管內(nèi)插入穿刺針,，絲線縫扎后用注射器灌注Liberase酶溶液（1.5 mg/ml）,。胰腺充分膨脹后將胰腺切片，置消化罐中并放入數(shù)顆玻璃珠,，加500 μm 孔徑的不銹鋼絲網(wǎng),，旋緊罐蓋。開啟蠕動泵將剩余的Liberase酶溶液泵入罐內(nèi)，控制罐內(nèi)溫度37℃,，手動振搖消化罐循環(huán)消化,，于10分鐘后開始取樣鏡檢，待大部分胰島分離后用冷的含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養(yǎng)液降溫稀釋終止消化,。收集消化物用10% FBS 1640離心洗滌,，將消化物混懸于150 ml UW液中，4℃冰浴30分鐘,。
加載1.100 Ficoll到COBE 2991細(xì)胞掏洗機,，從COBE排除空氣，啟動COBE 旋轉(zhuǎn)2,400 rpm,，分別加1.100和1.077的Ficoll到梯度形成儀,，將混合形成的連續(xù)梯度液泵入COBE，再泵入含組織UW液,，zui后泵入Hanks液,，讓COBE 在2,400 rpm轉(zhuǎn)5分鐘后分管收集純化后的組織，鏡檢各管,，將含有胰島的各管組織合并,，用10% FBS 1640離心洗滌兩次，取樣做胰島鑒定和計數(shù),。
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