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elisa操作問題常見解決辦法
閱讀：2069 發(fā)布時間：2013-3-5elisa操作問題常見解決辦法
ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,，如不注意，有可能導致顯色不全,、花板等結果,。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發(fā),，提高試驗質量,。
下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法1 選擇試劑 選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,，嚴格按照試劑說明書進行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣,； 2）手工操作中,，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外,。解決辦法： 1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后,，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測,，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內,。 2） 加樣后及時放入孵箱,。 3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自動加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5） 標本較多時，請分批操作,。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時未貼封片或加蓋,，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,，難于清洗*,； 2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,，難以清洗*,。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說明步驟嚴格控制操作時間,。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。 2） 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足,，導致洗板不*,；洗板針堵塞，抽吸不*,；洗板不暢,，導致洗板效果差。 3） 反應板過多造成洗板等待時間長,。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈,、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2） 合理安排，或多用幾臺洗板機,。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑,； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流,； 3） A,、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,，導致假陽性增加,。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等,。應保證酶標板清潔,。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量,。在實際操作中,，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作,，同時作好室內質控,、室間質評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,，才能保證檢測質量?，F(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測,、提高檢測質量起到了重要作用,。
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