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ELISA在食品微生物檢測中的應(yīng)用方法
閱讀:457 發(fā)布時間:2024-11-81. 直接ELISA法
直接ELISA法適用于檢測食品中的微生物抗原,。具體步驟如下:
· 將微生物抗原包被在微孔板上,。
· 加入待測樣本,樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合,。
· 加入酶標(biāo)記的二抗,,與樣本中的抗體結(jié)合。
· 洗滌后加入底物,,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,,從而定量測定樣本中的抗體含量。
2. 間接ELISA法
間接ELISA法適用于檢測食品中的微生物抗體,。具體步驟如下:
· 將已知微生物抗原包被在微孔板上,。
· 加入待測樣本,樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合,。
· 加入酶標(biāo)記的抗抗體(即二抗),,與樣本中的抗體結(jié)合。
· 洗滌后加入底物,,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,,從而定量測定樣本中的抗體含量。
3. 雙抗體夾心法
雙抗體夾心法適用于檢測食品中的大分子微生物抗原,。具體步驟如下:
· 將已知的第一抗體包被在微孔板上,。
· 加入待測樣本,樣本中的抗原與第一抗體結(jié)合,。
· 加入酶標(biāo)記的第二抗體,,與抗原的另一表位結(jié)合,形成雙抗體夾心復(fù)合物,。
· 洗滌后加入底物,,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,從而定量測定樣本中的抗原含量,。
4. 競爭ELISA法
競爭ELISA法適用于檢測食品中未知濃度的微生物抗原,。具體步驟如下:
· 將已知濃度的微生物抗原包被在微孔板上。
· 同時加入待測樣本和酶標(biāo)記的抗原,,二者競爭與固相抗原結(jié)合,。
· 洗滌后加入底物,顯色反應(yīng)后測定吸光度值,。由于待測樣本中抗原濃度的不同,,與固相抗原結(jié)合的酶標(biāo)記抗原量也會不同,從而影響顯色反應(yīng)的深淺,。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量測定樣本中的抗原含量,。
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