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細胞生長過程中被影響的因素
閱讀：790 發(fā)布時間：2024-5-31 細胞在體外進行培養(yǎng)失去了機體的調(diào)節(jié)和控制,，因此除滿足營養(yǎng)的要求外,，還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境,，外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓,、酸堿度等均能影響細胞的生長,。
一、溫度：
1.一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃,。溫度過高或過低都會影響到細胞的生長,。細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強，在低溫下,，細胞的代謝活力及核分裂降低,。溫度低于0℃時，雖影響細胞代謝,，但并無傷害作用,。把細胞置于23~25℃時，細胞仍能生存和生長,，但速度減緩，不過,，魚類細胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃,。
2.溫度過低，降到冰點以下細胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,，但若向培養(yǎng)基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護劑,，封入安瓿中后，置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中,，可起保護作用,，此時細胞可耐受-70℃以下溫度，能長期儲存，解凍后細胞復(fù)蘇,，仍能繼續(xù)生長增殖,，細胞物性狀不受任何影響。（這是保存細胞的主要手段）
3.高溫對細胞培養(yǎng)不利,。細胞在39~40℃培養(yǎng)1h,，會受到一定損傷，但仍有可能會恢復(fù),，但溫度不能再升高2℃,，持續(xù)數(shù)小時，即在41~42℃培養(yǎng)1h,，細胞操作嚴(yán)重,，溫度到43℃以上時細胞多數(shù)被殺死。高溫主要引起酶的滅活,、類脂質(zhì)破壞,、核分裂的破壞，產(chǎn)生凝固酶使細胞發(fā)生凝固,，另外使蛋白質(zhì)變性,。故體外培養(yǎng)細胞時一定要避免高溫。
二,、滲透壓：
細胞在高滲透溶液中低滲溶液中,，可以立即發(fā)生皺縮或腫脹、破裂,，所以滲透壓是體外細胞培養(yǎng)的重要條件,。按一定比例控制培養(yǎng)基中離子平衡，維持正常滲透壓是很重要的,，這不僅是為了維持細胞張力,，也是為了調(diào)節(jié)細胞的代謝。因為細胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質(zhì)的輸送（如氨基酸,、糖等）,，直接影響細胞基本合成系統(tǒng)。理想的滲透壓因細胞的類型及種族而異,，人血漿滲透壓為290mmol/L,，被視為是體外培養(yǎng)人類細胞的理想滲透壓，哺乳動物細胞的滲透壓一般為290~300mmol/L,，人胚肺成纖維細胞為250~325mmol/L,，鼠細胞則為310mmol/L左右。在實際應(yīng)用中,，260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數(shù)細胞,。
三,、氣體環(huán)境和PH值：
體外培植細胞需要理想的氣體環(huán)境，氧和二氧化碳石細胞生存必需的條件,。
1.氧：
氧參加細胞的三羧酸循環(huán),，產(chǎn)生能量以供應(yīng)給細胞生長、增殖和合成各種所需成分,。有些細胞在低氧條件下,，可借糖酵解取得能量，單多數(shù)細胞低氧時不能生存,。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài),，若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細胞有害。
2.二氧化碳：
采用開放式培養(yǎng)時（碟或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng)）,，一般要把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中,。CO2既是細胞的代謝產(chǎn)物，又是細胞生長所必需的成分,，并與維持培養(yǎng)基的pH值有關(guān),。在密閉瓶中CO2濃度偏低的情況下，細胞容易生長,，一般不能低于1%,，否則有損細胞。CO2增加將使pH值下降,。
3.pH值：
大多數(shù)細胞適于在pH7.2~7.4條件下生長,，低于pH6.8或高于pH7.6對細胞有害，甚至退變或死亡各種細胞對pH值的要求不盡相同,。一般原代培養(yǎng)細胞對pH值的堿性的耐受比對酸性的耐受差,，偏酸的環(huán)境比偏堿的環(huán)境對細胞生長有利。為了維持培養(yǎng)環(huán)境恒定的pH值,，多采用在培養(yǎng)基中加入磷酸鹽等緩沖劑的方法,。磷酸緩沖劑中的NaHCO3可供給CO2,但CO2易于逸出,故只適用于封閉式培養(yǎng)，若開放式培養(yǎng)還是置于含有5%CO2的氣體環(huán)境中為宜,，為克服NaHCO3調(diào)整的麻煩,也可用羧基哌唪硫磺酸,，它對細胞無毒性，主要作用是防止pH值迅速變動,，在開瓶通氣培養(yǎng)或活細胞觀察時能維持較恒定的pH值,。
四、無毒和無菌：
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要環(huán)境條件,。細胞在深入活體內(nèi)，細胞株偶爾有細菌或有害物質(zhì)入侵,，因體內(nèi)有強大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng),，可將其解毒或清除，而不易受損害。但在離體的環(huán)境中,，失去防御系統(tǒng),，有害物質(zhì)入侵或細菌污染，會導(dǎo)致細胞死亡,。
如培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、支持物,、培養(yǎng)基,、瓶塞上有細胞毒性，在培養(yǎng)過程中可導(dǎo)致細胞死亡因此,，在選用這些器皿,、材料時要注意，若這些物品消毒不徹-底,，帶菌或操作過程不小心使細胞污染,，也會導(dǎo)致細胞死亡。若出現(xiàn)交叉污染,，可使實驗室原來的細胞系失去原有特性,，應(yīng)引起足夠的重視。