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ELISA實(shí)驗(yàn)之細(xì)胞樣本的處理方法
閱讀：972 發(fā)布時(shí)間：2023-8-18ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定）是一種快速,、靈敏,、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用,。 利用ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見(jiàn)的血液（血清,、血漿），組織勻漿,、細(xì)胞裂解液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見(jiàn)的皮膚組織、尿液,、糞便,、肺泡灌洗液、唾液,、腦脊液,、胸腹水、前列腺液,、精液,、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。下面就常見(jiàn)ELISA細(xì)胞處理方法的整理,，希望對(duì)您有所幫助。
細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本,。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多,， 如細(xì)胞狀態(tài),、 細(xì)胞數(shù)量(大于 10^6),、ph(約為 7)、培養(yǎng)基鹽離子濃度,、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
如果目的物是分泌型,，主要在胞外,，即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內(nèi),，則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本類型,。細(xì)胞培養(yǎng)上清處理方法相對(duì)簡(jiǎn)單，取細(xì)胞培養(yǎng)上清,，1000×g 離心 20 分鐘,，取上清即可檢測(cè)。
細(xì)胞裂解液：
1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集） ,；
2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3次；
3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞,，再反復(fù)凍融） ：
? 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞,，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂,；
? 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 度以下冰凍,，室溫融解，反復(fù)3次,，使細(xì)胞溶脹破碎；
4）將標(biāo)本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,，收集上清備用,。
一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融,，勻漿等方法會(huì)比化學(xué)方法好,，因?yàn)榛瘜W(xué)方法會(huì)引入酸或堿，可能會(huì)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。我們也做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)測(cè)化學(xué)提取液和洗滌劑對(duì)ELISA檢測(cè)的影響,，如 RIPA,、TritonX-100、NP-40和SDS,、脫氧膽酸鈉,、β巰基乙醇、DTT 和尿素,。根據(jù)我們的質(zhì)檢結(jié)果,，高濃度的洗滌劑會(huì)影響ELISA檢測(cè)的終結(jié)果。然而,，其效果會(huì)洗滌劑濃度的降低而減少,。與其他化學(xué)裂解緩沖液相比，1％的 Triton X-100 和 1％NP-40 對(duì) ELISA檢測(cè)的影響較小,。如果一定要用化學(xué)提取方法的話,，推薦用這兩種洗滌劑來(lái)提取靶蛋白。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,，如果去污劑成分會(huì)干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測(cè)效果,，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。
處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程,，由于蛋白容易變性,，降解，故該過(guò)程應(yīng)盡量溫和,。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要,，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存,， 4 度保存應(yīng)小于 1 周,，-20 度不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月，-80度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月,。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,，不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的第yi步, ,，以上就是關(guān)于常見(jiàn)樣本處理方法的一個(gè)簡(jiǎn)述,，供研究者參考。