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ELISA常用檢測(cè)方法優(yōu)劣勢(shì)對(duì)比
閱讀：694 發(fā)布時(shí)間：2023-4-12我們知道,，Elisa可分為多種類型測(cè)定，是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白,、抗體,、或激素的免疫分析技術(shù)。 我公司技術(shù)部將各種Elisa常用方法的優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)進(jìn)行對(duì)比,，結(jié)果如下：
一,、直接法(direct Elisa)
將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體,，即可測(cè)定抗原總量,，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
1.優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)短,，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng),。
2.劣勢(shì)：試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記,，費(fèi)用相對(duì)提高,。
二、間接法(indirect Elisa)
此測(cè)定方法與直接法類似,，差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記,，改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量,。
1.優(yōu)勢(shì)：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析,。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它*多的免疫反應(yīng)性,。
2.劣勢(shì)：交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。
三,、雙抗體夾心法(sandwich Elisa)
被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體,。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體,，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量；或不標(biāo)記,，再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量,。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合部位,。
1.優(yōu)勢(shì)：高靈敏,、高專一性，抗原無(wú)須事先純化,。
2.劣勢(shì)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位,。
四、競(jìng)爭(zhēng)法(competitive Elisa)
樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競(jìng)爭(zhēng)相同的抗體,，當(dāng)樣品里的自由抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體,，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗步驟,，洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物,，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來(lái)與只有固定抗原的對(duì)照組結(jié)果相比較,，根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量,。
1.優(yōu)勢(shì)：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高,。
2.劣勢(shì)：整體的敏感性和專一性都較差,。