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查找:兔血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒說明書
閱讀:749 發(fā)布時(shí)間:2022-11-16使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中血小板衍生生長因子(PDGF)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中兔血小板衍生生長因子(PDGF)水平,。用純化的兔血小板衍生生長因子(PDGF)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血小板衍生生長因子(PDGF),,再與HRP標(biāo)記的血小板衍生生長因子(PDGF)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板衍生生長因子(PDGF)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔血小板衍生生長因子(PDGF)濃度。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月