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本試劑盒僅供研究使用,。

使用目的：本試劑盒用于測(cè)定樣本中維甲酸（Tretinoin）的含量,。

實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中維甲酸（Tretinoin）水平。用純化的維甲酸（Tretinoin）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入維甲酸（Tretinoin），和HRP標(biāo)記的維甲酸（Tretinoin）抗原,，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的維甲酸（Tretinoin）的含量呈負(fù)相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中維甲酸（Tretinoin）的含量。  

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本處理：

（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,，再經(jīng)玻璃纖維過濾后,，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，備查

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔,、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。  

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

 

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔。

4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

檢測(cè)范圍：2pg/ml -90 pg/ml

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

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