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一：實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維

素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時,。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進行包被后,，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入。

二：試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A,、B，和酶結合物同時作用,。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系,。

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