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小鼠胃動素(MTL)試劑盒操作手冊，新手快來,！
閱讀：1093 發(fā)布時間：2022-3-28【預(yù)期用途】
僅供科研使用,，本試劑盒用于測定小鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中胃動素(MTL)含量,。
【檢測原理】
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠胃動素(MTL)水平,。用純化的小鼠胃動素(MTL)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入胃動素(MTL),，再與HRP標記的胃動素(MTL)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的胃動素(MTL)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠胃動素(MTL)濃度,。
【操作步驟】
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
480pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
240pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
120pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
60pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
30pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
8.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10-20分鐘,。
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
注意：
1.試劑準備：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,。準備一次實驗所需要的酶標條,，其它的可從微孔板上拆下，密封,，按照說明書要求保存,，以備下次使用。
2.加樣：實驗操作中請使用一次性的滅菌吸頭,，避免污染,。加樣時注意不要有氣泡產(chǎn)生，將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。與反應(yīng)試劑加入一樣，加樣過程中第一個孔與最后一個孔加樣時間間隔盡量?。ㄒ话憧刂圃?0 分鐘以內(nèi)）,，如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育"時間,，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。為了測值的準確性,，推薦設(shè)置復(fù)孔進行實驗,。
3.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內(nèi),，以避免液體蒸發(fā),，洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài),，同時應(yīng)嚴格遵守給定的溫育時間和溫度,。
4.洗滌：濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。充分洗滌非常重要，在每次洗滌過程中,，都要將洗滌液*甩干,。洗滌過程中反應(yīng)孔內(nèi)殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將吸水紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印,，避免影響最后的酶標儀讀數(shù)。如果使用自動洗板機,，請在熟練使用后再用于正式實驗過程中,。
5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如觀察到顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
6.底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強光直接照射,。
【結(jié)果計算】
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
