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滬鼎生物分享：牛β乳球蛋白ELISA試劑盒使用手冊（新手適用）
閱讀：865 發(fā)布時間：2022-3-3【預(yù)期用途】
牛β乳球蛋白ELISA試劑盒主要用于測定牛乳樣本中β乳球蛋白（β-Lg）含量。
【檢測原理】
牛β乳球蛋白ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛β乳球蛋白（β-Lg）水平,。用純化的牛β乳球蛋白（β-Lg）抗體被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入β乳球蛋白（β-Lg）,，再與HRP標(biāo)記的β乳球蛋白（β-Lg）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β乳球蛋白（β-Lg）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度SD值,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中牛β乳球蛋白（β-Lg）濃度。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒檢測范圍】
1,、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明,、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,，無破損漏氣(如有漏氣,，不影響使用）。
2,、劑量反應(yīng)曲線線性
標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,，大于等于0.9900,。
3、檢測范圍
6μg/L -220μg/L,。
4,、靈敏度
檢出劑量最小不能小于1.5μg/L。
5,、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示,。CV（%） = SD/mean×100批內(nèi)差：取同批次試劑盒對低、中,、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測,，每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值,。批間差：選取3 個不同批次的試劑盒分別對低,、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測定,，每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定10 次,，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內(nèi)差： CV<5.3%
批間差： CV<9.1%
6,、回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率,。
7,、線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗,，得出回收率范圍及平均回收率,。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍,，8倍,，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率,。
8,、特異性
本試劑盒識別天然和重組牛β乳球蛋白（β-Lg），經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng),。由于受到技術(shù)及樣本來源的限制,，不可能完成所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)
,。9,、穩(wěn)定性
經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)務(wù)必按推薦溫度保存，活性降低率小于5%,。為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影,，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致,，尤其是實驗室內(nèi)溫度,、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進(jìn)行操作可減少人為誤差,。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,，用PBS（0.01 M,，pH 7.4）將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞（不能用胰酶和EDTA 處理）,，加入2-5 mL PBS（0.01 M,，pH 7.4）。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,，4℃ 1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次,。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150-250μL PBS重懸,。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融3次，使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的,。4℃ 10000×g 離心10min，除去細(xì)胞碎片,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h,，在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上,。樣本收集后，不是一次檢測完,，請按一次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒儲存條件及有效期】
1,、2-8℃保存,，切勿冷凍，有效期6個月,。
2,、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋,，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
注意：試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,，按實驗需求可分多次使用,；使用后的剩余試劑盒建議在實驗使用后1 個月內(nèi)使用完畢,。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的,。
由于篇幅有限,，完整版牛β乳球蛋白ELISA試劑盒的使用手冊請咨詢我司在線客服人員，也希望提供的信息給正在做科研的朋友們一些建議和參考,。
β乳球蛋白ELISA試劑盒相關(guān)信息：
【產(chǎn)品名稱】牛β乳球蛋白ELISA試劑盒
【規(guī)格】96T(檢測85個樣本) /48T(檢測37個樣本)
【用途】僅供科研實驗,，不用于任何臨床診斷及其他