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小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)方法
閱讀:1325 發(fā)布時間:2021-3-12平滑肌即無紋肌的通稱,,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨立的器官,,而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素(肌層),。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官,;在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運動和變形,,也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀,。
小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮,、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān).如支氣管哮喘,、慢性阻塞性肺疾病等,。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,,表型也發(fā)生改變,,由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子,;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象,。
小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)
1.取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,,泡于75%的酒精中
2.剖開胸腔,,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中
3.在體視顯微鏡下,,小心分離出下游支氣管
4.用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎
5.加入0.1% I + II + IV + dispase,,4℃過夜消化
6.第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h
7.待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,,充分吹打
8.過100目篩網(wǎng),收集濾液,,1000rpm離心5min,,棄去上清
9.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶,。
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