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細(xì)胞核的分離提取操作步驟
閱讀：2568 發(fā)布時(shí)間：2020-9-28一,、操作步驟
1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟,，剪成小塊（去除結(jié)締組織）盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中,，反復(fù)洗滌，盡量除去血污,，用濾紙吸去表面的液體,。
2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液,，先加少量該溶液于平皿中,，盡量剪碎肝組織后，再全部加入,。
3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之,，右手將勻漿搗桿垂直插入管中,，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，用3層紗布過(guò)濾勻漿液于離心管中,，然后制備一張涂片①,，做好標(biāo)記，自然干燥,。
4.將裝有濾液的離心管配平后,，放入普通離心機(jī)，以2500rpm,，離心15分鐘,；（1）緩緩取上清液，移入高速離心管中,，保存于有冰塊的燒杯中,，待分離線(xiàn)粒體用；（2）同時(shí)涂一張上清液片②做好標(biāo)記,，自然干燥,；（3）余下的沉淀物進(jìn)行下一步驟。
5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物,，以2500rpm離心15分鐘棄上清,，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上,，涂片③,，自然干燥。
6.將①,、②,、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察,。
二、結(jié)果
分別于高倍鏡下觀察三張涂片,，描述鏡下所見(jiàn),。
三、高速離心分離提取線(xiàn)粒體
1.操作步驟
① 將裝有上清液的高速離心管,，從裝有冰塊的燒杯中取出,，配平后，以17000rpm離心20分鐘,，棄上清,，留取沉淀物。
② 加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化鈣液lml,，用吸管吹打成懸液,，以17000rpm離心20分鐘，將上清吸入另一試管中,，留取沉淀物,，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液混勻成懸液（可用牙簽）。
③ 取上清液和沉淀物懸液,，分別滴一滴于干凈載玻片上（分別標(biāo)記④,、⑤涂片），各滴一滴0.02％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘,。
2.結(jié)果
油鏡下觀察,，顆粒狀的線(xiàn)粒體被詹納斯綠B染成藍(lán)綠色。
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