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ELISA實驗:血清,、血漿,、尿液、唾液和細胞的收集和處理方法
閱讀:1855 發(fā)布時間:2019-10-21 血清,、血漿、尿液,、唾液和細胞的收集和處理方法:
1.血清:用無菌管收集,,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,仔細收集上清,,保存過程中如出現沉淀,應再次離心,。
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA,、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心,。
3.尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
4.唾液:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
1.培養(yǎng)的細胞
A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,,使細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,,就采用超聲波破碎),,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
B,、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,,置于冰盒上,,用超聲破碎儀,設置破碎2s,,冷卻30s的方式,,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
2.組織的細胞
切割標本后,稱取1g組織,,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),,去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍,。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞,。
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