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abccom一抗與二抗的區(qū)別
閱讀：2217 發(fā)布時(shí)間：2019-10-11 一、抗體原理：
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
二,、抗體的定義：
指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng),。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行,?？乖贵w反應(yīng)的過(guò)程是經(jīng)過(guò)一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段,，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化,。多見(jiàn)的是“三抗”陽(yáng)性：“抗-HBs+、抗-HBe、和抗- HBc+”,，這說(shuō)明乙肝病毒感染結(jié)束,，體內(nèi)病毒清除，提示這個(gè)人免疫功能十分正常,，可以獻(xiàn)血,，也可以應(yīng)用他的血價(jià)乙肝免疫球蛋門（HBIG），用于對(duì)乙肝的防治,。二抗陽(yáng)性”即“抗-HBs+和抗-HBe+”或“抗-HBs+和抗-HBc+”
三,、種屬區(qū)別：
（1）第yi抗體就是平常所說(shuō)的抗體，即能和抗原特異性結(jié)合,。第二抗體是能和抗體結(jié)合的,，即抗體的抗體。主要用于檢測(cè)抗體的存在,。一抗是針對(duì)抗原的抗體,，二抗是針對(duì)一抗的抗體。即抗體也可以充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,。也就是說(shuō),，抗原進(jìn)入機(jī)體刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，由B細(xì)胞可以產(chǎn)生與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特殊蛋白質(zhì),。一抗二抗都是一種可以特異結(jié)合別的物質(zhì)的基團(tuán),，而且一抗可以至少結(jié)合兩種其他基團(tuán)（底物和二抗）。
（2）二抗：一般來(lái)說(shuō),，不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒(méi)有必然的,，來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里,， 如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里,，如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的，一個(gè)是小鼠來(lái)源的,，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的,。 可以特異結(jié)合底物,，就是識(shí)別出我們想要檢測(cè)的東西。一抗和底物結(jié)合與否用肉眼是看不出來(lái)的,。二抗：可以和一抗結(jié)合,，并帶有可以被檢測(cè)出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性,、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)）,，作用是檢測(cè)一抗。 如果一抗自己帶有可以被檢測(cè)出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性,、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)）,，則不需要二抗。但這樣成本很高,，因?yàn)橐环N一抗只識(shí)別一種底物,。所以如今的設(shè)計(jì)一般是二抗帶上可檢測(cè)標(biāo)記，再來(lái)檢測(cè)一抗,。而一抗識(shí)別底物,。這樣，當(dāng)一抗結(jié)合到底物上,，就可以通過(guò)二抗檢測(cè)出來(lái),。
四、操作步驟：
1. 包被：用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。(簡(jiǎn)稱洗滌,，下同)。
2. 5%脫脂乳（SMP）或者BSA 37℃（或者RT封閉）封閉1小時(shí),。棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。
3. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌,。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔),。
4. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。
5. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
6. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
7. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O·D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。
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