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“上海滬鼎”文獻(xiàn)：加味當(dāng)歸芍藥散抑制組蛋白乙?；缸饔脵C(jī)制研究
閱讀：1264 發(fā)布時間：2019-6-6“上海滬鼎”文獻(xiàn)：加味當(dāng)歸芍藥散抑制組蛋白乙?；缸饔脵C(jī)制研究
李燕紅 楊 謙 李錦亮 莊錦填 李振潔 鐘金寶
【摘 要】 目的 探討加味當(dāng)歸芍藥散抑制組蛋白乙酰化酶ｐ３００（ｐ３００ＨＡＴ）／血清環(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）通路調(diào)控核因子 Ｅ２相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２）在黃褐斑形成中的作用機(jī)制,。方法 健康人表皮黑素細(xì)胞及３０只雌性小鼠納入研究,，采用不同濃度加味當(dāng)歸芍藥散處理健康人表皮黑素細(xì)胞，肌肉注射huang體酮及紫外線照射建立黃褐斑小鼠模型,，將小鼠隨機(jī)分為空白組,、低劑量組及高劑量組各１０只，分別給予常規(guī)劑量０．９％氯化鈉注射液,、低劑量及高劑量加味當(dāng)歸芍藥散處理,，檢測不同濃度處理下細(xì)胞活力、細(xì)胞黑素含量及細(xì)胞中ｐ３００ＨＡＴ,、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量,，同時檢測治療前后３組小鼠皮膚及肝臟的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ,、蛋白質(zhì)表達(dá)量,。結(jié)果加味當(dāng)歸芍藥散濃度為１．０ｍｇ／ｍＬ 時健康人表皮黑素細(xì)胞活力較對照組明顯低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）,；加味當(dāng)歸芍藥散處理的健康人表皮黑素細(xì)胞ｐ３００ＨＡＴ,、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量和黑素相對含量較對照組明顯低，Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量較對照組明顯高,，且隨著加味當(dāng)歸芍藥散濃度增加,，健康人表皮黑素細(xì)胞 ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２,、Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量降低,、升高越明顯，健康人表皮黑素細(xì)胞黑素相對含量降低越明顯,，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）,；治療后僅低劑量、高劑量組ｐ３００ＨＡＴ,、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ,、蛋白表達(dá)量較治療前明顯降低，Ｎｒｆ２的ＲＮＡ,、蛋白表達(dá)量明顯升高,，且治療后高劑量組各項指標(biāo)變化較低劑量組明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）,。結(jié)論 加味當(dāng)歸芍藥散治療黃褐斑的機(jī)制可能與其抑制ｐ３００ＨＡＴ／ＣＯＸ－２通路調(diào)控 Ｎｒｆ２表達(dá)有關(guān),。
【關(guān)鍵詞】 黃褐斑； 環(huán)氧化酶２,； 加味當(dāng)歸芍藥散,； ｐ３００ＨＡＴ； Ｎｒｆ２
黃褐斑屬于臨床常見面部皮膚黑色素沉著疾病,，易診難治,，病因與日曬、內(nèi)分泌失調(diào),、遺傳,、情緒 及化妝品等有關(guān)，臨床對其治療尚缺乏單一藥,。近年來,，運用各種中藥治療黃褐斑并取得了一定的臨床療效［１］。現(xiàn)階段臨床對黃褐斑發(fā)病機(jī)制尚未*明確,，一項研究表明環(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）催化花生 四烯酸合成的具有生物學(xué)活性的前列腺素衍生物可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成消炎,、抗氧化的親電羰基衍生物分子， 并可解離轉(zhuǎn)錄因子核因子 Ｅ２ 相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２）,，激活多種與抗氧化相關(guān)的含抗氧化反應(yīng)元件（ＡＲＥ）應(yīng)答元件的基因,，ＣＯＸ－２調(diào)控 Ｎｒｆ２可能與其抗炎及抗氧化機(jī)制有緊密聯(lián)系［２］，其在黃褐斑形成中可能發(fā)揮一定作用,，此 外 ＣＯＸ－２ 的表達(dá)與共激活因子ｐ３００ＨＡＴ 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)［３］,。而近期一項研究指出當(dāng)歸芍藥散具有顯著的抗氧化、清除自由基等作用［４］,，因而本項目在既往研究基礎(chǔ)上開展檢測加味當(dāng)歸芍藥散作用人表皮黑素細(xì)胞生長情況以及組蛋白乙?；福穑常埃埃ǎ穑常埃埃龋粒裕ⅲ茫希兀?及 Ｎｒｆ２ 的表達(dá)水平,，并建立黃褐斑小鼠模型,，對其實行加味當(dāng)歸芍 藥 散 灌 胃 處 理 ， 并 檢 測 小 鼠 皮 膚 ,、 肝 臟 的
ｐ３００ＨＡＴ,、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２ 的表達(dá)水平，通過體外細(xì)胞實驗及體內(nèi)動物實驗研究,，探討加味當(dāng)歸芍藥散治療黃褐斑的有關(guān)機(jī)制,。
１ 材料與方法
１．１ 材料：３０只雌性昆明種小鼠由上海西普爾－必凱實驗動物中心提供,，小鼠體質(zhì)量１８～２０ｇ，平均體質(zhì)量（１９．６±０．３）ｇ,；健康人表皮黑素細(xì)胞株由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所提供,。主要試劑及儀器：①主要試劑：由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛試劑盒（批號：２０１３０５１７）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）試劑盒（批號：２０１４０３１９）,、總蛋白定量測試盒（批號：２０１４０３１９）,，由上海滬鼎生物科技有限公司提供的酪氨 酸 酶 酶聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗（ＥＬＩＳＡ）試劑盒，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供的huang體酮注射液（批號：１３０４０４）,，四甲基偶氮唑藍(lán),、二甲基亞砜由上海華美生物工程公司提供；②主要儀器：中波紫外線治療儀由 Ｓｉｇｍａ 公司提供,，ＤＧ３０２２Ａ 型酶標(biāo)儀由華東電子管廠提供,，由美國Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司提供的 Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ 型超純水儀，德 國ＩＫＡ 公司提供的ＩＫＡ Ｔ１８Ｂ 型組織勻漿機(jī),，美國Ｂｅｃｋｍａｎ公司提供的 Ｃｏｕｖｔｅｒ高速冷凍離心機(jī),。
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