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實驗過程中常見問題解答
閱讀：1473 發(fā)布時間：2019-3-14 上海滬鼎生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒供應(yīng)商,，代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,，專業(yè)供應(yīng)科研實驗所需的培養(yǎng)基，抗體,，動物血清血漿,，標(biāo)準(zhǔn)品對照品，化學(xué)試劑,，酶聯(lián)免疫試劑盒,，白介素試劑盒，金標(biāo)檢測試劑盒,，微生物,，蛋白質(zhì)，ELISA種屬涵蓋廣,。公司自成立以來憑借多年行業(yè)經(jīng)驗,，完善的售后服務(wù)，高質(zhì)量的產(chǎn)品一直為廣大科研者提供所需,。就目前總結(jié)出以下幾點實驗過程中常見問題：
1.一次ELISA實驗需要多長時間,？
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時,。
2.血清樣本如何處理,？
全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
3. 血漿樣本如何處理,？
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘,，仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
4.細(xì)胞上清液樣本如何處理,？
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（1000×g）,。仔細(xì)收集上清。
5.細(xì)胞裂解液樣本如何處理,？
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
6.組織樣本如何處理,？
用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,，取上清檢測。
7.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法,？
小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法,。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗體上的結(jié)合位點,，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少,，*后的顯色也愈淺,，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測定多用此法,。
8.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好,？
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便,，可以漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中,。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載。
9. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦,？
實驗結(jié)果不理想請及時與客服或技術(shù)支持聯(lián)系,，我們可以幫您一起分析實驗結(jié)果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷,，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測,。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題,，可以為您退換貨；如果是實驗操作的問題,，技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議。
希望以上文獻(xiàn)匯總能幫助大家了解目前研究進(jìn)展及我們的核心技術(shù),，歡迎各位老師聯(lián)系我們咨詢,、提出意見，愿我們的努力成果與您的科研碰撞出不一樣的火花,！