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陽光六月,滬鼎與您訴說ELISA吸附測(cè)定類型和操作過程
閱讀：1216 發(fā)布時(shí)間：2018-6-27 陽光六月是一個(gè)美麗多情的季節(jié),，在這個(gè)充滿這色彩的季節(jié)里，您是否要述說什么呢,？不如,，上海滬鼎與您訴說ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定類型與操作過程吧！了解它對(duì)您有益無害哦,！
ELISA試劑盒雙抗體夾心法檢查抗原：
雙抗體夾心法是檢查抗原常用的辦法,，但要留意的是在一步法（待測(cè)抗原與酶標(biāo)抗體一同參加反響）測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體,，而不再構(gòu)成“夾心復(fù)合物”呈現(xiàn)鉤狀效應(yīng),，乃至可不顯色而呈現(xiàn)假陰性成果。因而在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可反常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg,、AFP和尿液hCG等）時(shí),，應(yīng)留意可測(cè)規(guī)模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng),。 雙抗體夾心法測(cè)抗原的另一留意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子（RF）的攪擾,。RF是一種本身抗體，多為IgM型,，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段,。用作雙抗體夾心法檢查的血清標(biāo)本中如富含RF，它可充任抗原成份,，一同與固相抗體和酶標(biāo)抗體,，表現(xiàn)出假陽性反響。雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,，但不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能構(gòu)成兩位點(diǎn)夾心,。
雙抗體夾心法的扼要操作過程為：
1）先參加抗體,，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品,，使目標(biāo)檢查抗原構(gòu)成抗原-抗體復(fù)合物,；
3）加酶標(biāo)抗抗體（第二種動(dòng)物抗抗原的酶標(biāo)抗體）；
4）參加酶促反響底物,，發(fā)作顯色反響,，顯色的深淺與待測(cè)抗原的量成正比。
ELISA試劑盒競(jìng)賽法檢查抗原：
當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的抗體位點(diǎn),，因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,，能夠選用競(jìng)賽法形式。辦法的基本原理可見圖2,，經(jīng)洗刷后分成兩組：一組加酶符號(hào)抗原和被測(cè)抗原的混合液,，而另一組只加酶符號(hào)抗原，再經(jīng)孵育洗刷后加底物顯色,，這兩組底物降解量之差,，即為所要測(cè)定的不知道抗原的量。小分子激素,、藥物等ELISA測(cè)定多用此法,。
競(jìng)賽法的扼要操作過程：
1）先參加抗體，使抗體固定于載體外表,；
2）參加梯度濃度比例的待測(cè)樣品與酶標(biāo)抗原混合物,一同做只加酶標(biāo)抗原的對(duì)照組,；
3）參加酶促反響底物,，發(fā)作顯色反響，比照實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的顯色區(qū)別,，計(jì)算不知道抗原的量,。
雙抗原夾心法檢查抗體：
雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物,，以檢查相應(yīng)的抗體,。與間接法測(cè)抗體的不一樣之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,，可直接用于測(cè)定,，因而其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢查常選用本法,。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,，應(yīng)根據(jù)抗原構(gòu)造的不一樣，尋覓適宜的符號(hào)辦法,。
雙抗原夾心法的扼要操作過程為：
1）先參加抗原,，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品,，使目標(biāo)檢查抗體構(gòu)成抗原-抗體復(fù)合物,；
3）加酶標(biāo)抗原；
4）參加酶促反響底物,，發(fā)作顯色反響,，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。
間接法檢查抗體：
間接法是檢查抗體常用的辦法,。其原理為使用酶符號(hào)的抗抗體（辣根過氧化物酶符號(hào)的兔抗人免疫球蛋白抗體）以檢查與固相抗原的受檢抗體（人免疫球蛋白）,，故稱為間接法。本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢查而進(jìn)行流行癥的確診,。間接法的長處是只需改換包被抗原就可使用同一酶標(biāo)抗抗體樹立檢查相應(yīng)抗體的辦法,。
間接法的扼要操作過程：
1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)合，構(gòu)成固相抗原,；
2）加稀釋的受檢血清,，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原,，構(gòu)成固相抗原抗-體復(fù)合物,；
3）加酶標(biāo)抗抗體；
4）參加酶促反響底物,，發(fā)作顯色反響,，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。
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ELISA試劑盒競(jìng)賽法檢查抗體：
競(jìng)賽法測(cè)抗體的反響形式與競(jìng)賽法測(cè)抗原相似,。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物，以檢查相應(yīng)的抗體,。當(dāng)抗原材料中的攪擾物質(zhì)不易除去,，或不易得到滿足的純化抗原時(shí)，可用此法檢查特異性抗體,。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)賽與固相抗原,。標(biāo)本中抗體量越多，在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,，因而陽性反響呈色淺于陰性反響,。如抗原為高純度的，可直接包被固相,。競(jìng)賽法測(cè)抗體有多種形式,，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)賽，抗HBc ELISA通常選用此法,。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一同參加到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)賽,，洗刷后再參加酶標(biāo)抗體，與在固相上的抗原反響,?？笻Be的檢查通常選用此法。
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