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生物試劑的洗滌方法
閱讀：2463 發(fā)布時(shí)間：2018-2-7 洗滌這是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中看似很簡(jiǎn)單但又至關(guān)重要的一個(gè)步驟，所以今天小編結(jié)合技術(shù)人員的建議和指導(dǎo)來(lái)給你們普及一下這方面小知識(shí),。
生物試劑的洗滌方法
1. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒,。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，在潔凈的吸水紙上拍干,，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘,，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次,。
生物試劑實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí),，均需充分混勻,，并盡量避免起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡,，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。給酶標(biāo)板覆膜,，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2.棄去液體，甩干,，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí),。
3.棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板 3次,，每次浸泡1-2分鐘,，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,，加上覆膜,，37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，方法同步驟3,。
6.每孔加底物溶液100μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過(guò)30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),，即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng),，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值),。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器,，設(shè)置好檢測(cè)程序,。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。