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技術(shù)文章

上海滬鼎:ELISA試劑盒空白孔的設(shè)置

閱讀:2005          發(fā)布時(shí)間:2018-1-18

ELISA試劑盒空白對(duì)照有幾種:
1. 空氣空白水空白:一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。
2.底物空白:一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高,,同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值(只加底物和終止液)
3. 酶空白:一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用,,主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的,一般不做這個(gè) 
ELISA空白孔一般設(shè)一個(gè),,這是為了減除顯色液的OD值,。而陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)品是設(shè)2個(gè)復(fù)孔,雖然有點(diǎn)浪費(fèi),,但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性,,我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么,?一般兩個(gè)做法,,看個(gè)人習(xí)慣或者說看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣:
1,什么都不加,,然后那個(gè)孔按照操作流程來做,,這個(gè)說法的根據(jù)就是空白,也就是什么都沒有,。
2,,加樣本稀釋液,然后按照操作流程來做,。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的,,加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。

怎麼控制顯色時(shí)間,?
顯色時(shí)間要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間,,我用過OPD solution,一般incubation for 15min at RT,,測一次然后立即加入stop solution 在測一次,。

 

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