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上海滬鼎為您總結(jié)ELISA實(shí)驗(yàn)中的常見問題
閱讀：2540 發(fā)布時(shí)間：2017-6-13 轉(zhuǎn)眼間,，2017年已過半,，上海滬鼎在這半年里也一直在總結(jié)在進(jìn)步,，這源于客戶的支持和員工的努力，感謝各位讓我們在成長中進(jìn)步,，在進(jìn)步中發(fā)展,，取得不錯(cuò)的成績。在上半年,，客戶對(duì)ELISA試劑盒的咨詢也很多,，我司技術(shù)部都一一解答，助力客戶的實(shí)驗(yàn),。我司技術(shù)部將上半年ELISA試劑盒常見問題問答整理分析出來以方便各位了解,，下面，就跟隨小編一起來看看吧：
（1）問：小鼠乙酰膽堿酶聯(lián)免疫試劑盒后期數(shù)據(jù)處理中空白的OD值有什么作用,？
答：可以將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值同時(shí)減去空白的值進(jìn)行計(jì)算,，或者都不減,，保持同一水平就行。
（2）問：那我們算出來的ACH含量為什么出現(xiàn)負(fù)值,？
答：說明個(gè)別樣本的濃度很低,當(dāng)濃度接近第6個(gè)點(diǎn)的時(shí)候,直線方程就有可能計(jì)算出負(fù)值,。
（3）問：我兩個(gè)空白孔一個(gè)啥都不加，一個(gè)加了后面的A液,，B液還有終止液, 請問用哪一個(gè),？
答:用加了A液，B液還有終止液的那個(gè)更加準(zhǔn)確,因?yàn)闃颖径技舆^這些,，可以排除相應(yīng)的干擾,。
（4）問：我想問一下，標(biāo)準(zhǔn)品濃度與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值之間是不是線性回歸,？檢測出來的吸光度值很低一般都存在哪些原因,？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羥色胺（5-HT）酶聯(lián)免疫試劑盒）
答：是線性回歸,。檢測出來的值比較低 ,，樣本、稀釋,、操作等,，原因很多，但只要在可操作范圍就行 ,。
（5）問：做出來的結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度呈線性回歸,，但是樣品的吸光度都和本體吸光度值接近，正常未予干預(yù)的大鼠血漿都基本沒有5-HT 表達(dá),，這是什么原因,？（大鼠5羥色胺（5-HT）酶聯(lián)免疫試劑盒）
答：樣本、稀釋,、室控和機(jī)器操作等,，原因都可能造成吸光度都和本體吸光度值接近，好像熒光法里面有種試劑盒可以檢測滴度,。
（6）問：酶聯(lián)免疫試劑盒的使用的方法是什么?。?br /> 答：采用雙抗夾心法 （目前暫行）
（7）問：一個(gè)孔需要多少量的血清,？
答：一個(gè)孔上樣量10-50微升。
（8）問:未處理的樣本我需要郵寄多少的量,？
答：每個(gè)孔需要100ul
（9）問：樣本怎么保存,？
答：當(dāng)天要用的樣本保存4℃，隔天樣本-20℃（近期一個(gè)月左右要用的樣本）,，長期保存樣本-70℃（一年或者更長時(shí)間多久都可以用）,，避免反復(fù)凍融。
（10）問：EP管是什么管？
答：離心管,。
（11）問：收集血清的時(shí)候用什么管,？
答：普通離心管即可。
（12）問：96t可以檢測多少個(gè)樣本,？48t可以檢測多少個(gè)樣本,？
答：96t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測85個(gè)樣本，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,，1個(gè)空白對(duì)照,。96t單孔可以檢測90個(gè)樣，7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品控 1個(gè)空白對(duì)照,。48t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測37個(gè)樣本,，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照,。48t單孔可以檢測40個(gè)樣本,，其他有7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照,。
（13）問：標(biāo)準(zhǔn)的檢測85個(gè)樣本的和單孔相比,， 有什么好的地方嗎？
答：標(biāo)準(zhǔn)的檢測又叫復(fù)孔檢測,，標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)重復(fù)性測的結(jié)果好,，所以大家都叫復(fù)孔是標(biāo)準(zhǔn)的檢測。
（14）問： 酶標(biāo)板分次使用 剩下的建議怎么保持 ,？
答：要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下,。做點(diǎn)處理后：板條和板架都是可拆卸的，可以再用之,，前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子,，放到冰箱 2-8度保存。
（15）問：酶標(biāo)包被版是酶標(biāo)板嗎,？
答：是的,。
（16）問：請問植物茉莉酸和水楊酸檢測的試劑盒，我們提取擬南芥的,，一般取樣量是多少,？
答：1-3g。
（17）問：大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA,，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5B）,，我發(fā)現(xiàn)試劑盒里缺少標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，沒有它我的實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行,，盒子里面有特殊稀釋液是用來稀釋樣品的,，但都沒有標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,，我的樣品已超出zui低檢測限，所以需要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品才行嗎,？
答：特殊稀釋液是用來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的,，特殊稀釋液一般情況不用當(dāng)樣本濃度特別高是先用特殊稀釋液稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品需要再稀釋就也要用特殊稀釋液,。
（18）問：測出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線值前面幾盒都是0.98 才正常,，后面怎么變成0.93了？
答：某個(gè)點(diǎn)偏離大可以去掉,，保留5個(gè)點(diǎn)
（19）問：是不是空白對(duì)照就是什么都不加,？
答：不加樣本，不加樣本稀釋液,，不加酶標(biāo)試劑 其他都可以加,。
（20）問：樣本稀釋液是配好的嗎？
答：樣本稀釋液是配好的
（21）問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎,？
答：可以,，直接加40ul就可以。
（22）問：檢測的時(shí)候需要在操凈臺(tái)中操作嗎,，還是在外面操作就可以了,？
答：要求不是很嚴(yán)格，根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備而定,，都可以,。
（23）問：人和肽素（copeptin）酶聯(lián)免疫試劑盒，洗滌液是濃縮的,，是一次配好,，還是現(xiàn)配現(xiàn)用？
答：濃縮的,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
（24）問：酶聯(lián)免疫試劑盒方法的不測人血小板第四因子里IgG抗體的滴度嗎？
答：Elisa不測滴度的,，熒光法可以測,。
（25）問：酶標(biāo)板不平，影響結(jié)果嗎,？
答：不影響結(jié)果的,。
（26）問：小鼠TNF-α ELISA 我的標(biāo)本是細(xì)胞，我想要測的結(jié)果：抑制TNF的產(chǎn)生 空白組,、模型組,、藥物組，藥物組要成梯度抑制TNF的產(chǎn)生,、請問Elisa方法的可以測嗎,？
答：細(xì)胞可以測 但要分組，得到相應(yīng)的梯度值,，計(jì)算結(jié)果,。自己需要多查閱文獻(xiàn) 。
（27）問：人睪酮(T)酶聯(lián)免疫試劑盒,人雌三醇（E3）酶聯(lián)免疫試劑盒,，是用什么酶標(biāo)記的,？
答：辣根酶標(biāo)記的 標(biāo)本里不能加*
（28）問：我測植物水楊酸，標(biāo)本是煙草葉片怎么處理的,？那上清液檢測SA時(shí),，還需要用甲醇抽提嗎？
答：稱取煙葉500mg,，研磨成粉末狀,，加入5ml濃度為0.01mol，PH值為7.4的PBS溶液,，充分勻漿,，離心取上清液（3000-4000轉(zhuǎn)，15分鐘左右）,，分裝保存,，一般需要長期保存需放在-80度，或者液氮中,，備用,，不用加甲醇。
（29）問：沒有做出標(biāo)準(zhǔn)曲線來,，你知道什么原因嗎,？
答：操作肯定有問題，做之前把標(biāo)準(zhǔn)品搖勻下,。
（30）問：買同一個(gè)指標(biāo)的幾個(gè)盒子,，用不用都做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
答：如果同一個(gè)指標(biāo)買了3盒,，建議每盒都做個(gè)標(biāo)曲,。同一個(gè)盒子 ，即使分幾次用,，做一個(gè)標(biāo)曲也行了,，因?yàn)閿?shù)值不會(huì)偏差太大，差不多,。
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