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如何從脂肪組織中提取總蛋白,？
閱讀：4801 發(fā)布時(shí)間：2017-5-18 從培養(yǎng)的細(xì)胞和組織中提取總蛋白是實(shí)驗(yàn)室非常常見的實(shí)驗(yàn)步驟,，從大多數(shù)類型的細(xì)胞和組織中提取總蛋白比較容易,，但是從脂肪組織中提取高質(zhì)量和高濃度蛋白質(zhì)是非常困難的,。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型，被稱為白色脂肪組織（WAT）和棕色脂肪組織（BAT）,。脂肪組織中含有許多脂滴,，蛋白質(zhì)含量小于細(xì)胞總數(shù)的 2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白挑戰(zhàn)性,。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法：
A.RIPA 緩沖液提取法：
脂肪組織通過含有表面活性劑的緩沖液（例如 RIPA 緩沖液）勻漿,，離心后，收集脂肪層下的液體組分為蛋白質(zhì)，這種方法是相對(duì)簡單的,，但是蛋白質(zhì)的產(chǎn)量非常低,，因?yàn)楸砻婊钚詣┙?jīng)常導(dǎo)致蛋白質(zhì)形成微小顆粒導(dǎo)致蛋白丟失。
B. 有機(jī)溶劑萃取 TCA 沉淀法：
有以下三種方法：1）脂肪組織通過蔗糖密度梯度離心,，丙酮中加入三氯乙酸（TCA）-20℃ 過夜沉淀蛋白,。2）脂肪組織用有機(jī)溶劑提取液裂解（CHCl3和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀,。3）脂肪組織用有機(jī)溶劑提取液（TEF 和CHCl3勻漿,，通過離心將水相和CHCl3相分離，將其上的水相和交界面去除,，并通過離心蒸發(fā)干燥,。以上三種方法的共同問題是操作繁瑣，產(chǎn)量低,。
C. 離心管柱提取法：
這種方法利用了一種新的蛋白質(zhì)提取技術(shù),，脂肪組織通過無表面活性劑的緩沖液勻漿，水油乳狀液通過簡單的冷凍后,，離心使其通過特殊的離心管柱（有孔徑,，表面性質(zhì)被處理過的）提取。離心管柱的作用是快速,，干凈的從油相中分離出水相蛋白,。Invent Biotechnologies Inc 公司利用技術(shù)生產(chǎn)的這種脂肪蛋白提取試劑盒可以從脂肪組織中提取全部的總蛋白，產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他方法,。