一,、一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會迅速降低柱效。
二,、避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱,。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換,。
三、色譜柱使用過程中,,如果壓力升高,,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時應更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗,;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,,死體積增大。
四,、通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用,。柱子使用一段時間后,,可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復,。
五,、陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,,然后用水,、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物),、甲醇,、水依次沖洗。
六,、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。在進行清洗時,,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,,即常規(guī)分析需要50~75ml,。
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