一,、色譜柱由柱管、壓帽,、卡套(密封環(huán)),、篩板(濾片)、接頭,、螺絲等組成,。
二、色譜是一種分離分析手段,,分離是核心,,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,、氧化鋁,、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,,其粒度一般為3,5,7,10μm等,,柱效理論值可達5~16萬/米,。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,,只要500即可,;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要,。
三,、種類:
①常規(guī)分析柱(常量柱),,內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm,,國內(nèi)有4mm和5mm),柱長10~30cm,;
?、谡瓘街?narrowbore,又稱細管徑柱,、半微柱semi-microcolumn),,內(nèi)徑1~2mm,柱長10~20cm,;
?、勖毠苤?又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm,;
④半制備柱,,內(nèi)徑>5mm,;
⑤實驗室制備柱,,內(nèi)徑20~40mm,,柱長10~30cm;
?、奚a(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米,。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,,目的是為了避免管壁效應,。
四、維護:
硅膠柱以正已烷(或庚烷),、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必須嚴格脫水,。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),,已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水、甲醇,、乙腈,、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗,。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,,那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì),,在甲醇(乙腈)沖洗時重復注射100~200μl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì),。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外,,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。
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