凝膠過濾填料的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主,，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）,。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱,，先被洗脫下來,，小分子的化合物保留強，后出柱,。自GE的葡聚糖凝膠G25問世以來,，到現(xiàn)在已經(jīng)有65年的歷史，G系列的填料也是古老和經(jīng)典的凝膠排阻系列填料,，這種填料大的缺點就是不耐壓（尤其是G-100和G-200,，流體靜力壓要求非常低）和分辨率差，G25填料一般用于透析和較低分子量多糖或蛋白分離,，一般情況G25填料溶脹需要16-24h,，溶脹好后的填料從色譜柱側(cè)面看有一種多糖*的乳光。
凝膠過濾填料層析原理：
凝膠過濾：依賴于分子的大小和形狀,。
吸附層析：依賴于被分離化合物與凝膠之間的氫鍵數(shù)量和質(zhì)量,。
分配層析：依賴于分離化合物在流動相（溶劑）和固定相（凝膠）之間的分配，這主要由樣品的極性和溶劑的極性決定的,。
凝膠過濾填料可應(yīng)用于膽固醇,、脂肪酸、激素,、維他命,、天然產(chǎn)物的分析。Sephadex LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主,，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）,。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱,，先被洗脫下來,，小分子的化合物保留強,，后出柱。如果使用反相溶劑洗脫,， Sephadex LH20對化合物還起反相分配的作用,，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來,，極性小的化合物保留強,，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫,，這主要靠凝膠過濾作用來分離,。
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