葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羥丙基化制備,,并且專門適合用于有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子,天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化,,例如類固醇,,萜類化合物,脂質(zhì)和低分子量肽,。
葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法:
將干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分?jǐn)嚢瑁?,洗去可能存在的殘留物,抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱,,絕對(duì)不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱),,動(dòng)態(tài)用一倍柱體積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,,如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì),,并根據(jù)性質(zhì)確定柱高。如使用相同的溶劑,,在以后的層析中柱平衡可以省略,。
葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑:
葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫,,以甲醇——水系統(tǒng)最為常見,,先用水,逐漸增加甲醇比例,,最后用 100%甲醇沖柱,。正相系統(tǒng)以氯仿——甲醇最為常見,先用 50%氯仿——甲醇,,逐漸增加甲醇比例,,最后用 100%甲醇沖柱。
樣品的處理和洗脫溶劑的選擇:
如果樣品極性大,,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),,樣品用最少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(必須要進(jìn)行過濾,!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,,就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費(fèi)) ,。如果樣品極性小,, 這選用正相溶劑洗脫 (氯仿——甲醇) ,樣品用最少體積的氯仿——甲醇溶解,,過濾后,,濕法上樣。
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