軟骨組織由軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)組成,，軟骨組織及其周圍的軟骨膜構(gòu)成軟骨，軟骨根據(jù)基質(zhì)內(nèi)所含纖維素成分不同分為透明軟骨,、彈性軟骨,、纖維軟骨，軟骨染色方法有很多種,，例如甲苯胺藍(lán)法,、阿利新藍(lán)法,、番紅O法等。

Leagene改良番紅O-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色,，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而呈綠色或藍(lán)色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對比鮮明,，從而將軟骨組織與骨組織區(qū)分開,。番紅O是一種結(jié)合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團(tuán)（或硫酸角質(zhì)素）結(jié)合,，番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關(guān)系,，間接反映基質(zhì)中蛋白多糖的含量和分布；當(dāng)軟骨受到損傷時軟骨中的糖蛋白會釋放出來,，使基質(zhì)成分分布不均勻,，從而導(dǎo)致番紅O淡染或不著色，通過圖像分析軟件可對番紅O染色的軟骨基質(zhì)進(jìn)行定量分析,，固綠與膠原纖維結(jié)合,，不易褪色，番紅O-固綠染色的分化很關(guān)鍵,，分化過度易導(dǎo)致切片不著色,，分化不足易導(dǎo)致切片著色過深。該試劑僅適用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途,。