在常見的實驗中，進口人elisa試劑盒測定過程為試劑準備工作,，加樣,，洗滌，保溫等正常的實驗流程,，一次好的準備工作可以使測定中試劑發(fā)揮大的作用,，也可以因為一個小步驟而發(fā)生多種測定結果。那么在實際檢測前,，用戶都需要做哪些準備工作呢,？
加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本,，加酶結合物,，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產生氣泡。 加標本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標本應更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成,。
試劑盒準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的,，應為新鮮的和高質量的,。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。
保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后,?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation),，有人稱之為孵育,，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定,，抗原,、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此,。
洗滌：
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,，但卻也決定著實驗的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質,。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來,?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是主要的關鍵技術,，應引起操作者的高度重視,，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種
顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物,。
(2 )比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。
