色譜常見(jiàn)十四種使用問(wèn)題的詳細(xì)解答
問(wèn)：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關(guān)于漂移問(wèn)題：
1,、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置,，保持柱溫恒定
2,、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā),、反應(yīng)等
3,、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問(wèn)題
1,、流速發(fā)生變化,，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
2,、泵中有氣泡,，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
3,、流動(dòng)相不合適,，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
問(wèn)：色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問(wèn)題?
答：1、柱效要高
2,、熱穩(wěn)定性好
3,、化學(xué)惰性強(qiáng)
具體選擇應(yīng)注意
1、柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析
2,、柱子內(nèi)徑,。內(nèi)徑大小決定柱容量
3、液膜厚度,。分析樣品溫度一不一樣,，對(duì)膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚,，溫度低液膜要薄
4,、柱長(zhǎng)度。柱越長(zhǎng),，柱效越高,，分離效果越好，但也存在吸附問(wèn)題,，柱子過(guò)長(zhǎng),，分析時(shí)間長(zhǎng)，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長(zhǎng)
度
5,、外涂層（柱體）的選擇
6,、另外還有儀器型號(hào)、分析對(duì)象等因素
問(wèn)：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
答：1,、篩板堵塞或柱失效,，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子,。
2,、存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子,，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
問(wèn)：從那些方面可以簡(jiǎn)單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
答：1,、分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高溫運(yùn)行后,，分配容量K不應(yīng)有明顯的下降,，否則，說(shuō)明柱子的熱穩(wěn)定性不好,。
2,、理論塔板數(shù)n，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,，理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定
3,、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子,，高溫前后極性變化不大,，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒(méi)有大的變化,。
4、噪聲,。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后,，噪聲不能增加.
5、柱子的去活層,，毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性,。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后，去活層
不應(yīng)該變化,，表現(xiàn)在對(duì)強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加,。
問(wèn)：為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會(huì)對(duì)色譜行為造成影響?
答：進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用：
1、提供一個(gè)溫度均勻的汽化室,，防止局部過(guò)熱,。
2、玻璃的惰性不如不銹鋼好,，減少了在汽化期間樣品分解的可能性,。
3、易于拆換清洗 ,，以保持清潔的汽化室表面,，一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì)逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會(huì)慢慢分解,，使基
流增加,，噪聲增大，通過(guò)清洗玻璃襯套可以消除這種影響,。
4,、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積,，而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面
可以知道玻璃襯套對(duì)色譜行為造成影響的原因,。
問(wèn)：毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí),，非線性分流的主要原因是什么?
答：1、進(jìn)樣器溫度太低,，樣品汽化不*,，發(fā)生分級(jí)分流。
2,、進(jìn)樣器溫度太高,，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解,，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上,。
3,、在分流點(diǎn)以前樣品沒(méi)有混合均勻或混合不充分。
4,、系統(tǒng)的進(jìn)樣墊,，柱接頭等地方漏氣。
問(wèn)：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答：1,、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2,、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4,、檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可,。
5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6,、檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗,。
7、檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣,。
8,、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
9,、流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可,。
10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器,，重作校正曲線,。
問(wèn)：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定,，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：
1,、泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理,；
2、比例閥失效,，更換比例閥即可,。
3、泵密封墊損壞,，更換密封墊即可,。
4、溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣,，必要時(shí)改變脫氣方法；
5,、系統(tǒng)檢漏,，找出漏點(diǎn),，密封即可。
6,、梯度洗脫,，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
問(wèn)：做PGS／MS分析時(shí),，如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細(xì)柱?
答：聚合物,，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時(shí),，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生,。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)柱造成污染
而使柱性能下降，可采用保護(hù)預(yù)柱,，即在裂解器與毛細(xì)柱之間接一填充預(yù)柱,，通過(guò)控制預(yù)柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預(yù)柱內(nèi)
，預(yù)注可置于GC氣化室內(nèi),，這樣既容易控制溫度,，又減少系統(tǒng)的死體積，當(dāng)然,，預(yù)柱填料需經(jīng)常更換,。
問(wèn)：我zui近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱，雖然分離情況仍可以,，但保留時(shí)間不能重現(xiàn),，為什么?
答：這是因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺浣〉哪芰Α１M管過(guò)去幾年來(lái),，填料的制造技術(shù)有了極大的提高,，但不同的廠商的ODS填料
表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用,。因此,，同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào)的ODS柱上的相
對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競(jìng)爭(zhēng)物,，如三乙基胺（TEA）,，將會(huì)使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號(hào)柱
子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性,。
問(wèn)：我購(gòu)買的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高,，請(qǐng)問(wèn)為什么?
答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶zui常碰到的問(wèn)題,。其原因有多方面,，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的
起因,。
1,、拆去保護(hù)柱,，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題,，若柱壓仍高,，再檢查；
2,、把色譜柱從儀器上取下,，看壓力是否下降，否則是管路堵塞,，需清洗,，若壓力下降，再檢查,。
3,、將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子,，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器,，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性
）。這時(shí),，如果柱壓仍不下降,，再檢查；
4,、更換柱子入口篩板,，若柱壓下降，說(shuō)明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升,。若柱壓
還高，請(qǐng)與廠商,。一般情況下,，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE提供的Rheodyne
7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的*選擇,。
問(wèn)：高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長(zhǎng)?
答：毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外,，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度,、樣品狀態(tài),，進(jìn)樣量等，如果在其
使用溫度范圍內(nèi),，樣品干凈,，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間,。
問(wèn)：如毛細(xì)管柱被污染,，柱效和分辨率降低,，有何方法使它恢復(fù)?是否可通過(guò)老化來(lái)解決?
答：根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來(lái)解決，如果污染不嚴(yán)重,，污染物沸點(diǎn)不是太高,，可通過(guò)老化來(lái)解決，但老化溫度不可
超過(guò)柱子的zui高使用溫度,，且一般要較長(zhǎng)時(shí)間（8—30小時(shí)）,，如果污染較嚴(yán)重，或通過(guò)老化仍不能使柱性能恢復(fù),，那就必須采用
溶劑清洗,，通常是用5倍柱容積的溶劑（如正戊烷，二氯甲烷等）通過(guò)色譜柱,。當(dāng)然,，清洗溶劑用的越多，對(duì)柱性能的損壞越大,，
清洗完后,，在通載氣老化一定時(shí)間，如果柱性能恢復(fù),，便可繼續(xù)使用,。必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗，對(duì)于非交聯(lián)柱,，清洗
柱會(huì)*失效,，因?yàn)楣潭ㄒ罕幌吹袅耍劣谇逑从萌軇┑倪x擇,，可參考說(shuō)明書(shū),。
問(wèn)：BPX70毛細(xì)管柱是否可用于GC／MS分析?
答：*可以，BPX70為極性柱,，使用溫度范圍寬（25—260℃）,，程序升溫可達(dá)290℃，流失低,，適合于分析脂肪酸甲酯的各種位
置和幾何異構(gòu)體,，藥物異構(gòu)體，碳水化合物等,。因BPX70為交聯(lián)住,，故用于GC／MS很穩(wěn)定，污染后可清洗再生,。
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