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[供應(yīng)]黃曲霉 B1（AFTB1）ELISA試劑盒
黃曲霉 B1(AFTB1)ELISA檢測試劑盒
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被 黃曲霉 B1(AFTB1)捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的 黃曲霉 B1(AFTB1)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品
- 酶標儀（450nm）
- 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
- 37℃恒溫箱
操作注意事項
- 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
- 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。
- 預處理后的樣本無需稀釋,，直接取10μL加樣即可,。
- 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。
- 所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 8孔×12條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品（200 ng/mL） | 0.6mL | 0.6mL | 按說明書進行稀釋 |
標準品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：200、100,、50,、25、12.5,、0ng/mL.
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
- 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。
- 自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設(shè)置標準品孔,、樣本孔和空白孔,，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
- 待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；
- 隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
- 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
- 所有孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
- 所有孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
6. 檢測范圍：6.25 ng/ml -200ng/ml
黃曲霉 B1（AFTB1）ELISA試劑盒 黃曲霉 B1（AFTB1）ELISA試劑盒
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