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酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析
閱讀:1781發(fā)布時(shí)間:2016-1-12
酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,酶標(biāo)儀在用單波長測定吸光度時(shí),,除受到測定內(nèi)源性干擾( 包括噪音、漂移,、電壓等) 因素外,,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,,由于液面表面張力的作用,,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,,從側(cè)面看似凹透鏡,,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,,光線在通過液面時(shí),,除正常的被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射( 如光線通過凹透鏡那樣) ,,影響吸光度的檢測,。而酶標(biāo)儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點(diǎn)光源,如果每次能在同一部位檢測,,吸光度的重復(fù)性將得到保證,,但由于機(jī)械運(yùn)動等造成的誤差,,不可能保證每孔都在相同部分被檢測,,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,,在雙波長測定中,,減少了測定干擾和電路干擾,因此測定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn),。由于液體表面張力的不同,, 導(dǎo)致單波長測定時(shí)誤差較大。 并且用不同的洗滌劑會影響到zui后加入底物和終止液后的液面情況,,用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后,, 形成的液面更凹, 對單波長檢測的影響更大,,并且與表面活性劑的濃度成正比,。而用中性蒸餾水洗滌后,單,、雙波長檢測技術(shù)結(jié)果基本一致,。
酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,,在酶聯(lián)免疫法測定抗原、抗體中,,常用標(biāo)記酶辣根過氧化物酶所使用的底物一般是鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺,,顯色終止后,二者在6 3 0nm 和6 5 5nm處的吸光度值都只在吸收峰處 (4 9 2 n m/4 5 0 nm )吸光度值的 1 %以下,,因此,,利用雙波長檢測,不會影響檢測的靈敏度,。建議在進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測時(shí),, 酶標(biāo)儀比色應(yīng)該首先雙波長。這樣可以提高臨界值處標(biāo)本的分析準(zhǔn)度,, 減少實(shí)驗(yàn)誤差,。
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