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酶標(biāo)儀的原理
閱讀:2342發(fā)布時(shí)間:2015-8-26
微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,,板上有多排大小均勻一致的小孔,,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.
光是電磁波,,波長100nm~400nm稱為紫外光,,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光,。人們只所以能夠看到色彩,,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,,是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光,,但對(duì)綠色不吸收,反射出來,,所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,,檢測被測物的吸光值,。
檢測單位
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,,特定波長下,,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示,, OD是optical density(光密度)的縮寫,,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),,其中trans為檢測物的透光值,。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι 其中E表示被吸收的光密度,, Ι0 為在檢測物之前的光強(qiáng)度,,Ι為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算:
C為檢測物的濃度 D為檢測物的厚度 E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,,在此波長下,,此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段,,就會(huì)造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確,。因此,在測定檢測物時(shí),,我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測,,稱為測量波
長,。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,,我們再選取一個(gè)參照波長,,以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長下,,檢測物光的吸收zui小,。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
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