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酶標(biāo)儀用于檢測(cè)鈣離子通路的兩種方式
閱讀：3070發(fā)布時(shí)間：2020-2-26
酶標(biāo)儀用于檢測(cè)鈣離子通路主要通過兩種方式：
1,，熒光法?；衔锱c細(xì)胞膜上離子通道結(jié)合后,，改變離子通道狀態(tài),，通道打開，鈣離子進(jìn)入細(xì)胞,。進(jìn)入細(xì)胞后與細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光指示劑結(jié)合,，發(fā)出熒光后酶標(biāo)儀捕獲，熒光強(qiáng)度與進(jìn)入細(xì)胞的鈣離子含量成正比,。熒光指示劑多用FLuo3,，F(xiàn)luo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物，可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細(xì)胞內(nèi),，鈣離子進(jìn)入細(xì)胞后與之結(jié)合，會(huì)發(fā)出較強(qiáng)的熒光,。
2,，發(fā)光法。水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）,、分子氧和底物腔腸素組成,。只有當(dāng)鈣離子（Ca2+）與該復(fù)合物結(jié)合后，腔腸素才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide,，同時(shí)釋放出CO2和藍(lán)色熒光（——466 nm）,。正是此Ca2+依賴性的反應(yīng)過程（見圖1），使得腔腸素非常適用于監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平,。與常規(guī)的熒光鈣離子指示劑相比,，其主要具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，1）能檢測(cè)較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM至 >100μM,；2）樣品無自體熒光,，背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑；雖然信號(hào)比使用熒光鈣離子指示劑弱,，但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比,，因此具有更高的靈敏度。3）水母發(fā)光蛋白復(fù)合體能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi),，使其能夠進(jìn)行數(shù)小時(shí)至數(shù)天的鈣離子監(jiān)測(cè),。
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