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ELISA試劑盒的使用流程

閱讀:2394發(fā)布時(shí)間:2017-1-2

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,,例如:ELISA檢測試劑盒,、ELISA Kit,、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,,得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展,。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),,重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。關(guān)于ELISA試劑盒的使用流程如下:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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