透析技術(shù)自Thomas Graham 于1861年發(fā)明到現(xiàn)在已有一百多年的歷史,，它已成為生物化學(xué)實驗室zui簡便,，zui常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,，去除鹽,、少量有機溶劑、小分子雜質(zhì),、樣品濃縮和改變微量樣品的緩沖系統(tǒng)等都要用到透析技術(shù),。
生物樣品的透析只需使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),，浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),，而鹽和小分子等物質(zhì)不斷擴散透析到袋外,，直到袋內(nèi)、外兩邊的濃度達到平衡,。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的溶質(zhì)濃度梯度形成的,。透析的速度同欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,、膜的面積和溫度成正比，與膜的厚度成反比,。升高溫度可加快透析速度,。為zui大限度地保持生物大分子的活性，通常采用4℃透析,。
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,，但用的zui多的還是用纖維素制成的透析膜。目前較常用的是美國Union Carbide （聯(lián)合碳化物公司）和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,，其截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量,，縮寫為MwCO）通常從700到數(shù)萬不等。
商品化的透析袋可制成管狀,，其扁平寬度為6～50 mm不等,。為防干裂，出廠前一般都經(jīng)10％的甘油處理,，透析袋中含有微量的硫化物,、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,，用前必須除去,。新購進的透析袋必須經(jīng)過處理才能使用。50％的乙醇煮沸1小時,，再依次用50％乙醇,、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌，再用蒸餾水沖洗后即可使用,。實驗證明,，50％乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于蒸餾水中,，置4℃保存,。若長時間不用，可加入適量的疊氮鈉（NaN2）,，以抑制微生物的生長,。干的透析袋彎折時易出現(xiàn)裂口，用時必須仔細檢查,。
經(jīng)過處理的透析袋,，使用時，一端用橡皮筋或線繩扎緊,，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿蒸餾水，用手指稍加壓,，檢查是否漏液,，確證無誤后，再用蒸餾水洗凈,，方可裝入待透析樣品,。裝入樣品時通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中,，因透析樣品中的小分子濃度較大,，袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過YE時,，體積增加是正常的,，有時甚至可達50％以上。透析可以使用燒杯,、量筒和塑料桶等容器,，容器的大小以20-50:1為宜。少量樣品溶液的透析,，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,，以使透析袋沉入液面以下。
通常為了把握透析效果,，有時需要對透析液中欲去除的小分子殘留物進行分析,，如甘氨酸、二甲基甲酰胺,、甲醛,、戊二醛、碳酸根,、偶聯(lián)劑等,。小分子殘留物的檢測分析方法很多，如 (NH4)2SO4可用1％的BaCl2檢查,，NaCl,、KCl等可用1％的AgNO3 檢查。有些檢測方法比較復(fù)雜,，或需要一定的條件,，如確有必要可參考相關(guān)文獻資料。
為了加快透析速度,，提高透析效率,，除及時更換透析液外，還可使用磁力攪拌,，還可以使用各種透析裝置,。使用者也可以自行設(shè)計與制作各種簡易的透析裝置,。美國生物醫(yī)學(xué)公司（Biomed Instruments Inc.）生產(chǎn)的各種型號的Zeineh 透析器，由于使用對流透析的原理,，使透析速度和效率大大提高,。
附：透析袋的處理
1. 根據(jù)需要，把透析管剪截成適當(dāng)長度（10—20cm）,。
2. 在大體積的2%（w/v）碳酸氫納和1mmol/L EDTA(pH8.0)中將透析管煮沸10分鐘,。
3. 用蒸餾水*清洗。
4. 于EDTA(1mmol/L,，pH8.0)中煮沸10分鐘,，
5. 或?qū)⑼肝龉苤檬⒂姓麴s水的燒杯內(nèi)，高壓蒸汽滅菌10分鐘,。
6. 冷卻后,，存放于4℃。透析管必須確保始終浸于溶液中,。
7. 從此時起取用透析管時總須戴手套,。
8. 用前將透析管用蒸餾水清洗干凈后即可使用。 透析袋的標(biāo)識： 27mm(MD34)透析袋[MW:3500] 27mm是指透析袋干燥時的直徑 MD34mm是指透析袋干燥時壓平的寬度 MW:3500是指透析袋的截留分子量 |
