共聚焦爬片培養(yǎng)貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
1. 提前半小時(shí)在37°C預(yù)熱培養(yǎng)基,、PBS,、胰酶。
2. 準(zhǔn)備2mL和10mL移液管,、1.5mL離心管,、等相關(guān)材料。
實(shí)驗(yàn)方法：
1.從培養(yǎng)箱中取出,，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)：密度,、細(xì)胞形態(tài)、貼壁情況等,。
2.在超凈臺(tái)內(nèi),，放入預(yù)熱好的培養(yǎng)基,、PBS和胰酶。點(diǎn)酒精燈,，燒培養(yǎng)皿口,，將原培養(yǎng)基吸掉。
3.加入適量PBS至培養(yǎng)皿底部,，前后輕柔搖勻,，清洗細(xì)胞。
4.去掉PBS,，加入適量胰酶,，靜置5-10min（時(shí)間和量根據(jù)不同細(xì)胞調(diào)整）。注意,，胰酶需要預(yù)先調(diào)配好,。
5.終止消化：若消化下來(lái)，在底部加適量培養(yǎng)基（根據(jù)觀察的細(xì)胞密度決定）終止消化,，并用槍輕柔吹打多次,，將壁上剩余細(xì)胞吹打下來(lái)，均勻后取少量計(jì)數(shù),。
6.根據(jù)需要的量稀釋細(xì)胞,，細(xì)胞懸液滴滿共聚焦爬片表面后，放入培養(yǎng)箱,，30分鐘左右細(xì)胞附著到爬片后,，再沿內(nèi)壁添加培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng),。
7.細(xì)胞培養(yǎng)好后,，吸取掉廢液，用鑷子夾在支架側(cè)面,，取出支架,。
8.雙手捏住支架兩側(cè)輕輕一拉即可輕松取出爬片，繼續(xù)接下來(lái)的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng)：
1.操作時(shí)需注意無(wú)菌操作,，盡量避免污染。
2.確保培養(yǎng)皿的液體不要沾到瓶口,，每次打開(kāi)瓶口都需要用酒精燈消毒,。
3.因?yàn)橘N壁細(xì)胞更脆弱，因此放入培養(yǎng)皿中的液體都需要37°C 預(yù)熱,。
4.共聚焦爬片傾斜30°以上,，輕拉，防止拉開(kāi)一瞬間爬片掉落,，防止爬片破裂,。
5.共聚焦爬片為一次性產(chǎn)品,，不可重復(fù)使用，爬片區(qū)分正反面,，拆開(kāi)即用,！