細胞培養(yǎng)培養(yǎng)板的操作步驟如下：

　　1.加樣品：將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(nèi)(預留陰陽性及空白對照2-5孔),，將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應孔內(nèi),。

　　2.加對照：加入陰性對照1-3孔，陽性對照1孔，各100ul對照血清,?？瞻讓φ?孔空置。

　　3.溫育：將反應板震蕩使樣品混勻后,，置37℃溫箱或水浴反應20分鐘,。

　　4.洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗：將反應板孔內(nèi)容物傾出,，將洗滌液注滿反應孔,，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復5次后拍干,。(2)機洗：5次,，每孔注入洗滌液200ul或注滿，停留30秒鐘后吸盡拍干,。

　　5.加酶標工作液：每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,，置37℃溫箱反應20分鐘后，洗板5次,，洗板操作同步驟4,。

　　6.顯色和終止反應：將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應孔內(nèi),，37℃避光顯色10分鐘,。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應。

　　結果判定

　　1.酶標儀設定波長450nm,，先用空白調(diào)零,，然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定，不必設置空白對照孔,。

　　2.當陰性對照平均OD值小于0.08,，陽性對照(pc)OD值大于0.30時，說明試劑盒有效且實驗操作正確,，否則應當重復試驗,。

　　3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當陰性平均OD值小于0.05時，按0.05計算;當陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算),。

　　4.標本OD值≤臨界值為陰性,，標本OD值>臨界值為陽性。

　　常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,，一般在2-3mm范圍,，結合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換,，而且在搬動過程中易溢出造成污染,。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握,。