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一,、原理

飼料版黃曲霉B1ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中黃曲霉B1的殘留量。

二,、適用范圍

定量檢測飼料等樣品中黃曲霉B1的殘留,。

三、飼料版黃曲霉B1ELISA檢測試劑盒特點及技術(shù)指標

* 檢 測 時 間 ： 30 min

* 試劑盒靈敏度： 0.03ppb(µg/kg)

* 樣本處理方法簡單,，并與玉米赤霉烯酮前處理方法部分統(tǒng)一化,，節(jié)省了人力物力；

* 試劑盒提供工作濃度標準品,，使用更方便,；

* 試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm,、振蕩器,、離心機、刻度移液管（10 mL）,、洗耳球,、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL,、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：甲醇,、去離子水。

五,、 試劑盒組成

*注：A,、B,、C、D,、E 5個標準品濃度為：0ppb，0.03ppb,，0.09ppb,，0.27ppb,，0.81ppb,，A,、B標準品各1mL，其余各0.5mL,，直接使用,。

六：溶液配制

配液1: 洗滌工作液

   用去離子水將20 ×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋。配好的洗滌工作液在4 ℃環(huán)境可保存一    個月,，用前一天取出回溫,。

配液2: 1 ×黃曲霉B₁稀釋液        

   用去離子水將2 ×黃曲霉B1稀釋液按1:1體積比進行稀釋。配好的1 ×黃曲霉B1稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫,。

配液3: 樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液,。 

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應及時進行下步檢測,，實驗中必須使用一次性吸頭,，吸取不同試劑時要更換吸頭,。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

全麥,、全玉米,、花生粕,、豆粕、乳豬料,、豬育肥料、牛飼料,、DDGS等（稀釋倍數(shù)：100倍）

① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 10 mL 樣品提取液（配液3）,， 震蕩提取1 min,；

② 4000 r / min離心5 min；

  ③ 小心移取上清液100 μL 加到300μL 1 ×黃曲霉B1稀釋液中， 混勻,，取50 μL用于分析,。    

八,、 酶標免疫測定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
•  按標準品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標準品/樣品,、酶,、抗體：加標準品/樣品50µL到對應的微孔中,，加入黃曲霉B1酶標物50µL/孔,，再加入黃曲霉B1抗體50µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應20min,。
•  洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，

加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s,，甩去孔內(nèi)液體，重復洗滌3次,，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）,。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔,，再加底物    

液B液50µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應10min,。

• 測定：加入終止液50µL/孔,，用酶標儀立即  測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測,。

九,、 結(jié)果判定

以標準品百分吸光率為縱坐標,，以黃曲霉B1標準品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標,，繪制標準曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉B1實際濃度,。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,，以便進行大量樣本的分析計算,。）

十、 注意事項

① 洗板拍干后應立即進行下一步操作,。

② 反應終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚,。

③ 不使用過了有效期的試劑盒,，不交換使用不同批號的試劑,。

④ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時,，表示試劑可能變質(zhì),。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺,，可延長反應時間到20min,，反之則減短反應時間。

⑥ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務部,。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月