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一,、原理

嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中嘔吐毒素的殘留量。

二,、適用范圍

定量檢測糧食,、飼料等樣本中嘔吐毒素殘留,。

三、嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測 時 間 ： 30 min

  試劑盒靈敏度：5 ppb (µg/kg)

* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜2ppb

* 樣品處理方法更加簡潔,，符合率大于90%

試劑盒檢測樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm,、均質(zhì)器,、振蕩器、離心機(jī),、天平（感量0.01 g）,、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道50µL～300µL

試劑：去離子水,、甲醇

五,、 試劑盒組成

*注：A、B,、C,、D、E共5個標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0 ppb, 10 ppb, 30 ppb,90ppb, 270ppb, A,、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL,，其余各0.5mL，直接使用,。

六,、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋，用于酶標(biāo)板的洗滌,，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月,，用前一天取出回溫。

配液2:  1×嘔吐毒素樣品稀釋液     

用去離子水將2×嘔吐毒素稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋,，用于樣本的稀釋,，配好后在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫,。

配液3:  樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇,，即樣品提取液。

七,、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測,，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭,。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣,。

花生粕、豬育肥料,、乳豬料,、牛飼料,、玉米、全麥（稀釋倍數(shù)：20）

① 稱取樣品1.0g ± 0.05g至離心管中,，加入

10 mL樣品提取液（配液3）,，震蕩提取1min；

② 4000rpm離心5min.,；

③ 小心移取上清液500 μL 加到500 μL 1×嘔吐毒素樣品稀釋液中,， 混勻，取50 μL用于分析,。

八、 酶標(biāo)免疫測定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用,。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
•  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔,。
•  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品,、酶、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL 到對應(yīng)的微孔中,，加入嘔吐毒素酶標(biāo)物50µL /孔,， 再加入嘔吐毒素抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min,。
•  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干,，

加入洗滌工作液250µL/孔,，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體,，重復(fù)洗滌3次,，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔,，再加底物    

液B液50µL/孔,，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min,。

•  測定：加入終止液50µL/孔,，用酶標(biāo)儀立即  測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測。

九,、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),，以嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中嘔吐毒素實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,，以便進(jìn)行大量樣本的分析計算,。）

十、 注意事項

① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。

② 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚。

③ 不使用過了有效期的試劑盒,，不交換使用不同批號的試劑,。

④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì),。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺,，可延長反應(yīng)時間到20min,，反之則減短反應(yīng)時間。

⑥ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部,。

• 貯藏條件及保存期

     貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月