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替米考星-替米考星ELISA檢測(cè)試劑盒
  • 替米考星-替米考星ELISA檢測(cè)試劑盒

貨物所在地:山東濱州市

地: 山東省濱州市黃河二路169號(hào)

更新時(shí)間:2025-05-21 21:00:08

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替米考星ELISA檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中替米考星的殘留量。定量檢測(cè)組織樣本中替米考星殘留。

一,、原理

替米考星ELISA檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品替米考星殘留量。

二,、適用范圍

定量檢測(cè)組織樣本中替米考星殘留,。

三、替米考星ELISA檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測(cè) 時(shí) 間 : 30min

  試劑盒靈敏度: 0.1ppb(µg/kg)

* 試劑盒檢測(cè)純陰性樣本的背景值<0.04ppb,;

* 樣品處理方法簡(jiǎn)潔,,符合率大于95%;

試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度:

試劑盒交叉反應(yīng)率:

藥物

交叉反應(yīng)率%

替米考星

100

紅霉素

12

環(huán)丙沙星

1

,、所需材料

儀器微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm,、均質(zhì)器、振蕩器,、離心機(jī),、天平(感量0.01 g)、離心管(5 mL, 50 mL)

微量移液器:?jiǎn)蔚?1µL~10 µL,、10 µL~100µL

多道 50µL~300µL

試劑:去離子水,、乙腈

、 試劑盒組成

序號(hào)

組成部分

96T裝量

1

替米考星酶標(biāo)板

12×8孔

2

替米考星標(biāo)準(zhǔn)品*5

5×0.5mL

3

替米考星酶標(biāo)物

7 mL

4

替米考星抗體

7 mL

5

底物A液

7 mL

6

底物B液

7 mL

7

終 止 液

7 mL

9

2×替米考星樣品稀釋液

40mL

10

10×替米考星樣品提取液

40mL

11

20×洗滌液

40mL

樣本

檢測(cè)下限

回收率

組織

10ppb 

70%-120%

*注:5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品A,、B,、C、D,、E濃度分別為:0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7 ppb,,A、B各1 mL,,C,、D、E各0.5 mL,,直接使用,。

 

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)糜诿笜?biāo)板的洗滌,,洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,,用前一天取出回溫。

配液2:  1 ×替米考星樣品稀釋液    

用去離子水將2×替米考星樣品稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋,。配好替米考星樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,,用前一天取出回溫。

配液3:  1 ×替米考星樣品提取液    

用去離子水將10×替米考星樣品提取液9:1體積比進(jìn)行稀釋,。配好替米考星樣品提取液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,,用前一天取出回溫。

七,、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知:

① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測(cè),,實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭,。② 樣本數(shù)目超過(guò)8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣,。

組織(稀釋倍數(shù):100)

  • 稱(chēng)取糊狀樣品1.0g ± 0.05g至50mL離心管中,加入2mL 替米考星樣品提取液,, 震蕩提取1min,;
  • 再加入2 mL乙腈,震蕩提取1min,;
  • 4000rpm離心5min.,;
  • 小心取出上層溶液50μL至另一裝有950μL 替米考星樣品稀釋液的離心管中,震蕩混勻,,取50μL用于分析,。

、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序

  • 將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,,待其*回升至室溫后方可使用,,根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1小時(shí)~2小時(shí)。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
  •  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔,。
  •  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶,、抗體:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL到對(duì)應(yīng)的微孔中,,加入替米考星酶標(biāo)物50µL/孔,加入替米考星抗體50µL/孔,,輕輕振蕩混勻,,用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min。
  •  洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,,將孔內(nèi)液體甩干,,

加入洗滌工作液300 µL/孔,每次靜置20s,甩去孔內(nèi)液體,,重復(fù)洗滌3次,,后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。

  •  顯色:加入底物液A液50 µL/孔,,再加底物    

   液B液50 µL/孔,,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜             

     蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min,。

  • 測(cè)定:加入終止液50µL/孔,,用酶標(biāo)儀立即  測(cè)定450/630nm處的吸光度值。

,、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),,以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實(shí)際濃度,。(詳見(jiàn)試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件,,以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。)

,、 注意事項(xiàng)

① 根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1 h~3 h,,體積15 mL以上的先從冷藏環(huán)境取出回溫,

洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。

反應(yīng)終止液為2M硫酸,,避免接觸皮膚。

不使用過(guò)了有效期的試劑盒,,不交換使用不同批號(hào)的試劑,。

⑤ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì),。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,,一般顯色    時(shí)間為15min即可。若顏色較淺,,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20min,,反之則減短反應(yīng)時(shí)間。

⑦ 底物液B液長(zhǎng)期使用變?yōu)闇\藍(lán)色時(shí),,請(qǐng)放心使用,,不影響檢測(cè)結(jié)果。

十一,、貯藏條件及保存期

    貯藏條件: 28

保 質(zhì) 期: 12個(gè)月

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