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一,、原理

玉米赤霉烯酮ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中玉米赤霉烯酮的殘留量,。

二、適用范圍

定量檢測糧食,、飼料等樣本中玉米赤霉烯酮殘留,。

三、玉米赤霉烯酮ELISA檢測試劑盒特點及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測 時 間 ： 30min

  試劑盒靈敏度： 1ppb(µg/kg)

* 試劑盒檢測前處理方法與*B1二合一,，節(jié)省了人力物力,；

* 試劑盒提供工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品，使用更方便,。

 試劑盒檢測樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

 儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm,、均質(zhì)器,、振蕩器、離心機(jī),、天平（感量0.01 g）,、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL,、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水、甲醇

五,、 試劑盒組成

*注：A,、B、C,、D,、E共5個標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0 ppb, 1ppb, 3 ppb, 9ppb, 27ppb, A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL,，其余各0.5mL,，直接使用。

六,、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋,，用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月,，用前一天取出回溫,。

配液2:  1×玉米赤霉烯酮稀釋液     

    用去離子水將2×玉米赤霉烯酮稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋，用于樣本的稀釋,，配好后在4℃環(huán)境可保存一個月,，用前一天取出回溫。

配液3:  樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇,，即樣品提取液,。 

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測,，實驗中必須使用一次性吸頭,，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣,。

玉米、全麥,、花生粕,、育肥料、乳豬料,、牛飼料

（稀釋倍數(shù)： 100 倍）

① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至50ml離心管中,，加入10 mL樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min,；

② 4000 r / min離心5 min,；

 ③ 小心移取上清液100 μL 加到400 μL 1×玉米赤霉烯酮樣品稀釋液中， 混勻,，取50 μL用于分析,。  

八,、 酶標(biāo)免疫測定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用,。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
•  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品,、酶,、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL 到對應(yīng)的微孔中，加入玉米赤霉烯酮酶標(biāo)物50µL /孔,， 再加入玉米赤霉烯酮抗體50µL/孔,，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min,。
•  洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干，

加入洗滌工作液250µL/孔,，每次靜置20s,，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次,，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）,。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物    

液B液50µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

•  測定：加入終止液50µL/孔,，用酶標(biāo)儀立即  測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測,。

九、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),，以玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中玉米赤霉烯酮實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,，以便進(jìn)行大量樣本的分析計算,。）

• 注意事項
• ① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

② 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚,。

③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑,。

④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時,，表示試劑可能變質(zhì),。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可,。若顏色較淺,，可延長反應(yīng)時間到30min，反之則減短反應(yīng)時間,。

⑥ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部,。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月