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一,、原理

赭曲霉毒素A ELISA檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中赭曲霉毒素A的殘留量,。

二,、適用范圍

定量檢測(cè)糧食、飼料等樣品中赭曲霉毒素A的殘留,。

三,、赭曲霉毒素A ELISA檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測(cè) 時(shí) 間 ： 30 min

* 試劑盒靈敏度： 0.2 pb(µg/kg)

* 樣本處理方法簡(jiǎn)單，并與玉米赤霉烯酮前處理方法部分統(tǒng)一化,，節(jié)省了人力物力,；

* 試劑盒提供工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品，使用更方便,；

* 試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：

試劑盒特異性：

四,、所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、振蕩器,、離心機(jī),、刻度移液管（10 mL）、洗耳球,、天平（感量0.01 g）,、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：?jiǎn)蔚?1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：甲醇,、去離子水,。

五、 試劑盒組成

*注：A,、B,、C、D,、E 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0ppb, 0.2ppb, 0.6ppb,1.8ppb, 5.4ppb,，A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL,，其余各0.5mL,，直接使用。

六：溶液配制

配液1: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋,。配好的洗滌工作液在4 ℃環(huán)境可保存一    個(gè)月,，用前一天取出回溫。

配液2: 1×赭曲霉毒素樣品稀釋液        

   用去離子水將2×赭曲霉毒素樣品稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋,。配好的1×赭曲霉毒素樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,，用前一天取出回溫。

配液3: 樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇,，即樣品提取液,。 

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測(cè),，實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭,。

② 樣本數(shù)目超過8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣。

乳豬料,、豬育肥料,、全麥、牛飼料,、玉米,、DDGS（稀釋倍數(shù)：100倍）

 ① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 10 mL 樣品提取液（配液3）,， 震蕩提取1 min,；

② 4000 r / min離心5 min,；

 ③ 小心移取上清液100 μL 加到300μL1×赭曲霉毒素樣品稀釋液中,， 混勻，取50 μL用于分析,。    

八,、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用,。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
•  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品,、酶,、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入赭曲霉毒素酶標(biāo)物50µL/孔,，再加入赭曲霉毒素抗體50µL/孔,，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min,。
•  洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干，

加入洗滌工作液250µL/孔,，每次靜置20s,，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次,，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）,。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物    

液B液50µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

•  測(cè)定：加入終止液50µL/孔,，用酶標(biāo)儀立即  測(cè)定450nm處的吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）檢測(cè),。

九,、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中赭曲霉毒素A實(shí)際濃度,。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算,。）

十,、 注意事項(xiàng)

① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

② 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚,。

③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號(hào)的試劑,。

④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí),，表示試劑可能變質(zhì)。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色時(shí)間為10～15min即可,。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20min,，反之則減短反應(yīng)時(shí)間,。

⑥ 未提及樣本請(qǐng)致電本公司技術(shù)服務(wù)部。

十一,、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個(gè)月