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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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血液RNA核酸免提取試劑盒
試劑盒應(yīng)用
本試劑盒采用特殊裂解液B從新鮮全血,、抗凝血,、血凝塊中提取并純化RNA。整個過程僅需要10分鐘,。采用硅基材質(zhì)吸附柱,，高效專一吸附RNA，保證提取高純度,、高產(chǎn)量RNA,。該裂解液配方中含有RNA保護劑，能夠抑制RNA降解,、保護RNA完整,，從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR,、RT-qPCR,、Northern Blot、分子克隆,、文庫構(gòu)建等,。
本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床,、食品,、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
組分 | Col-R0301（50T） | 編號 |
裂解液B | 35 mL | Col-R0301A |
洗滌液BW1 | 25 mL | Col-R0301B |
洗滌液BW2 | 12 mL | Col-R0301C |
洗脫液B | 5 mL | |
RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0301E |
備注：1,、第一次使用前,，在洗滌液BW2中加入48mL無水乙醇，并標記“√"和時間,，避免重復(fù)加入,。
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
水浴鍋或金屬浴,、無水乙醇、1.5mL無RNase離心管,、蛋白酶K（20mg/mL,，或貨號QR0301）,、DNase I（2U/μL，或貨號QR0102）
使用方法
1. 300μL血液（不足300μL,，無菌PBS補齊）中加入500μL裂解液B和10μL蛋白酶K,，顛倒混勻。
2. 55℃孵育2分鐘,。
備注：如果RNA提取量比較低,，可延長孵育時間到10分鐘。
3. 12,000rpm離心30秒,。取750μL上清,。
4. 加入0.5倍體積無水乙醇，上下顛倒混勻,，
5. 全部加入RNA吸附柱中,，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液,。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液BW1,，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液,。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液BW2,，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液,。
8. 重復(fù)步驟7一次,。
9. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液,。
10. 將RNA吸附柱放入新1.5mL無RNase離心管中,，加入30-50μL洗脫液B，室溫放置1分鐘,。
11. 12,000rpm離心2分鐘,，得到RNA溶液，-80℃保存,。
注意事項
1. 務(wù)必在超凈臺中進行操作,，常換手套，防止RNA降解,。
2. 盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取,。
3. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解,，常更換吸頭,，防止交叉污染。
4. 為了提高洗脫效率,，可提前將洗脫液B置于65℃水浴后再使用,。
5. 根據(jù)后續(xù)試驗需求,，請使用DNase I（貨號QR0102）進行基因組清除。
常見問題解析
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | （1）上樣量太高 （2）加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物 | （1）減少上樣量,。 （2）增加離心時間,。 （3）切勿吸取到可見固體成分。 （4）再次離心,。 |
RNA得率低 | （1）未離心下來 （2）樣本量太大,，裂解不充分 | （1）減少樣本量。 （2）重復(fù)洗脫步驟一次,。 |
RNA降解 | （1）樣本不新鮮 （2）RNA酶污染 | （1）使用新鮮樣本,。 （2）使用保存在樣品保存液中樣本。 （3）樣本保存在-80℃甚至液氮中,，盡可能現(xiàn)取現(xiàn)用,。 （4）常更換手套。 （5）常更換吸頭和離心管,。 （6）使用無DNase無RNase的吸頭和離心管,。 |
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