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RNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用zhuan利裂解液配方,，有針對性的從組織、培養(yǎng)細胞,、拭子,、血液、尿液,、唾液,、環(huán)境樣本中獲得病毒RNA。裂解,、提取和純化只需10分鐘,。該配方中添加RNA保護劑，能夠抑制RNA降解,、保護RNA完整，從而提高RNA產(chǎn)量,。提取后的RNA可直接用于RT-PCR,、RT-qPCR、分子克隆,、文庫構(gòu)建等實驗。

本試劑盒僅供研究使用,，不可用于臨床,、食品、化妝品等領(lǐng)域,。

試劑盒組成

備注：第一次使用前,，在洗滌液VRII中加入48mL無水乙醇，并標記“√"和時間,，避免重復(fù)加入,。

保存條件

室溫保存一年,。

自備材料

水浴鍋或金屬浴,、無水乙醇,、1.5mL無RNase離心管

使用方法

1. 樣本處理方法

1.1 從動物組織中提取

1.1.1 取20-100mg組織樣本放入液氮中充分研磨,，加入700μL裂解液VR,，顛倒混勻,。

或者取20-100mg組織樣本加入700μL裂解液VR,，加入1顆鋼珠,，放入組織研磨器中,，研磨1-2分鐘,。

1.1.2 55℃孵育1分鐘。12,000rpm離心1分鐘,。

1.1.3 取500μL上清加入250μL無水乙醇,，充分混勻,。按照步驟2.1-2.7進行操作。

1.2 從懸浮細胞中提取

1.2.1 細胞1,000rpm離心5分鐘,，收集細胞沉淀,。

1.2.2 細胞數(shù)量<5×10⁶個時，加入500μL裂解液DV,。細胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個時,，加入700μL裂解液VR。輕輕吹打混勻,，55℃孵育1分鐘,。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細胞數(shù)量<5×10⁶個時,，取450μL上清,。細胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個時，取650μL上清,。

1.2.5 加入0.5倍體積無水乙醇,，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作,。

1.3 從貼壁細胞中提取

1.3.1 yimei消化細胞后1,000rpm離心5分鐘,，收集細胞沉淀。

1.3.2 細胞數(shù)量<5×10⁶個時,，加入500μL裂解液DV,。細胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個時，加入700μL裂解液VR,。輕輕吹打混勻,，55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘,。

1.3.4 細胞數(shù)量<5×10⁶個時,，取450μL上清。細胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個時,，取650μL上清,。

1.3.5 加入0.5倍體積無水乙醇，充分混勻,。按照步驟2.1-2.7操作,。

1.4 從血液、尿液,、唾液,、細胞上清液中提取

1.4.1 300μL樣本中加入500μL裂解液VR。顛倒混勻,，55℃孵育1分鐘,。

1.4.2 加入400μL無水乙醇,，上下顛倒混勻。按照步驟2.1-2.7操作,。

1.5 從拭子中提取

1.5.1 拭子置于700μL裂解液VR中,，顛倒混勻，55℃孵育1分鐘,。

1.5.2 加入350μL無水乙醇,，上下顛倒混勻。按照步驟2.1-2.7操作,。

2. 提取步驟

2.1 1全部加入RNA吸附柱中（如有需要可離心兩次）,，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液,。

2.2 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液VRI,，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液,。

2.3 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液VRII,，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液,。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次,。

2.5 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液,。

2.6 將RNA吸附柱放入新1.5mL無RNase離心管中,，加入30-50μL洗脫液VR，室溫放置1分鐘,。     

2.7 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液,，-80℃保存,。

注意事項

1、務(wù)必在超凈臺中進行操作,，常換手套,，防止RNA降解。

2,、盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取,。

3、使用無DNase無RNase的吸頭和離心管,，防止RNA降解,，常更換吸頭，防止交叉污染,。

4,、為了提高洗脫效率,，可提前將洗脫液VR置于65℃水浴后再使用。