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一,、原理

喹諾酮類ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中喹諾酮類的殘留量。

二,、適用范圍

喹諾酮類ELISA檢測試劑盒定量檢測組織,、生鮮奶樣本中喹諾酮類殘留。

三,、試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測 時(shí) 間 ： 30min

  試劑盒靈敏度： 0.1ppb(µg/kg)

* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜4ppb,；

* 樣品處理方法簡潔,，符合率大于95%；

試劑盒檢測樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：

試劑盒交叉反應(yīng)率：

四,、所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm,、均質(zhì)器、振蕩器,、離心機(jī),、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL,、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水,、乙腈、正己烷

五,、 試劑盒組成

*注：A,、B、C,、D、E共5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb,，A,、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL，其余各0.5mL,，直接使用,。

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋,，用于酶標(biāo)板的洗滌,，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月，用前一天取出回溫,。

配液2: 1×喹諾酮類樣品稀釋液

   用去離子水將2×喹諾酮類樣品稀釋液按1: 1的體積比進(jìn)行稀釋,，用于樣本前處理的稀釋，

七,、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測,，實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭,。② 樣本數(shù)目超過8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣,。

組織（稀釋倍數(shù)：100)

① 稱取樣品1.0g ± 0.05g至50mL離心管中，加入2mL 0.01M 氫氧化鈉,，震蕩提取1min,，加入2mL乙腈 震蕩提取1min；

② 4000rpm離心5min.,；

③ 小心取出上層溶液50μL至另一離心管,，加入950μL 0.01M PBS，震蕩混勻30s，取50μL用于分析,。

生鮮奶（稀釋倍數(shù)：100)

10μL生鮮奶至另一離心管,，加入990μL 去離子水，震蕩混勻30s,，取50μL用于分析,。

八、 酶標(biāo)免疫測定程序

• 將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,，待其*回升至室溫后方可使用,，根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1小時(shí)~2小時(shí)。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
•  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔,。
•  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶,、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL到對應(yīng)的微孔中,，加入喹諾酮類酶標(biāo)物50µL/孔，加入喹諾酮類抗體50µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min。
•  洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，

加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s,，甩去孔內(nèi)液體,，重復(fù)洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）,。

•  顯色：加入底物液A液50 µL/孔,，再加底物    

   液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜             

     蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min,。

• 測定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即  測定450/630nm處的吸光度值,。

九,、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以喹諾酮類標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類實(shí)際濃度,。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。）

十,、 注意事項(xiàng)

① 根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1小時(shí)~3小時(shí),，體積15毫升以上的先從冷藏環(huán)境取出回溫，

②  洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。

③ 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚。

④不使用過了有效期的試劑盒,，不交換使用不同批號的試劑,。

⑤ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì),。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色    時(shí)間為15min即可。若顏色較淺,，可延長反應(yīng)時(shí)間到20min,，反之則減短反應(yīng)時(shí)間。

⑦ 底物液B液長期使用變?yōu)闇\藍(lán)色時(shí),，請放心使用,，不影響檢測結(jié)果。

⑧ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部,。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個(gè)月